可见分光光度法和紫外分光光度法专家讲座.pptxVIP

第十三章

可见分光光度法和紫外分光光度法;第一节

物质吸收光谱;分光光度法一个主要特点是灵敏度高，被测物质最低可测浓度可达10-5mol?L-1~10-6mol?L-1，故尤其适合用于微量及痕量组分测定。分光光度法测量相对误差普通为2%～5%，精密仪器可减至1%左右。;分光光度法(spectrophotometry)是一个当代仪器分析方法，它理论基础是物质吸收光谱和光吸收定律。

依据所用光源波长不一样，分光光度法可分为三类：

可见分光光度法：380nm~780nm

紫外分光光度法：10nm~380nm

红外分光光度法：780nm~3?105nm

;单一波长光称为单色光，由不一样波长组成光称为复色光。白光(日光、白炽灯光等)就是一个复色光，它是由红、橙、黄、绿、青、蓝、紫等颜色光按一定强度百分比混合而成。若两种颜色光按适当强度百分比混合可成白光，则这两种光称为互补色光。;互补色光示意图;光照射某物质，物质能够吸收光，使原有基态转为激发态，只有当分子能量(h?)与被照射物质粒子基态和激发态能量之差(?E)相等时才能被吸收。

M(基态)+h???M*(激发态);物质对光吸收含有选择性，若溶液选择性地吸收了某种颜色光，则溶液呈吸收光互补光。如CuSO4溶液选择性地吸收白光中间黄色光，故CuSO4溶液呈蓝色。

;任何一个溶液对不一样波长光吸收程度是不一样。为了研究溶液对不一样波长光吸收情况，可将不一样波长单色光依次经过某一定浓度有色溶液，测量该溶液对不一样波长单色光吸收程度，即吸光度A(absorbance)。

以波长?为横坐标，吸光度A为纵坐标作图，可得一曲线，即为吸收光谱(absorptionspectrum)或称吸收曲线(absorptioncurve)。;

;吸收光谱中，吸光度最大处波长为最大吸收波长，用?max表示。

定性分析依据：1.曲线形状；2.?max；3.ε

定量分析依据：A∝c

;1.配制一浓度适合标准溶液，测量其在不一样波长下吸光度值。绘出A-λ曲线，即吸收曲线。;2.在吸收曲线上求得最大吸收波长λmax，在此波长下，测定一系列已知浓度标准溶液吸光度值，作出吸光度与浓度曲线A-c，???工作曲线或标准曲线。;3.测出待测溶液吸光度值，由标准曲线上求出该吸光度下对应浓度值，此值既待测溶液浓度，要注意是，普通情况下，要换算为原液浓度。;第二节

分光光度法基本原理;

;;被测溶液和参比溶液吸收池一样材料和厚度，反射光等强度影响相互抵消，上式简化为：

透射光强度It与入射光强度Io之比称为透光率(transmittance)，用T表示：

T取值范围：0～1。;透光率负对数称为吸光度，用符号A表示。A愈大，溶液对光吸收愈多。

A取值范围：0～∞。

影响吸光度A原因：溶质、溶剂、浓度、温度、液层厚度、入射光波长等。;由A与T关系，还可得到：

【例】当吸光度为A1时，透光率为T1，当吸光度A2=2A1时，透光率T2与关系T1怎样？

【解】

;二、Lambert—Beer定律;若用质量浓度?代替c

a:质量吸光系数(percentageabsorptivity)，单位

L?g-1?cm-1

a和?可经过下式相交换算:

;医药学实际中有时也用比吸光系数。比吸光系数是指100mL溶液中含被测物质1g，液层厚度b为1cm时吸光度值，用表示，它与a关系

为：

与?关系为：;吸光系数?(或a)随不一样物质、波长、溶剂及温度而异，所以它能够表示一个物质吸收特征。吸光系数大小反应出吸光物质对光吸收程度，?愈大，表示该物质对某波长光吸收能力愈强，测定灵敏度就愈高，测定时选择含有最大?值波长作为入射光。普通?值大于103即可进行分光光度法测定。通常所说吸光系数也指是在吸收光谱中?max?。;透光率T与溶液浓度c(或液层厚度b)之间关系也能够以指数函数关系来表示：

;某一有色溶液浓度为c，测得透光率为T0，把浓度稀释到原来1/2，在一样条件下测得透光率为

A.