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实验九培养基的配制和高压蒸汽灭菌

一．实验目的

1.了解微生物的营养需求。

2.学习并掌握培养基配制的方法。

3.学习并掌握高压蒸汽灭菌原理和培养基的灭菌方法。

二．实验原理培养基是由人工配制的、微生物在实验室的生长环境。在合适的营养物组成的培养基上，微

生物吸收培养基中的水分和营养物质，从中获得能量并合成组成细胞所需的物质和代谢产物。

微生物的种类繁多，不同营养类型的微生物对营养物质的要求也不同，必须根据微生物对营养的要求以

及研究的目的配制合适的培养基。

除了营养物质以外，培养基的pH也是一个很重要的因素。因为pH会影响到培养基中营养物质的离子

化程度，还会影响到微生物代谢过程中各种酶的活性。因此配制培养基时一定要了解微生物对环境pH的要

求。

为防止配制好的培养基中微生物的生长，因此配制好的培养基必须立即灭菌。对于培养基的灭菌，一

般采用湿热灭菌即高压蒸汽灭菌。高压蒸汽灭菌是利用高温引起菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌效果的。

三．实验器材

1.培养基成分：牛肉膏，蛋白胨，氯化钠，琼脂

2.试剂：1mol/LNaOH溶液，1mol/LHCl溶液

3.玻璃器皿：三角烧瓶，烧杯，量筒，试管，漏斗

4.其它材料：pH试纸，搅棒，纱布，电子秤，药匙，棉塞，牛皮纸，棉线，记号笔等

四．实验步骤

1.培养基的配制

(1)称量：根据牛肉膏蛋白胨培养基配方(详见附录II)和配制培养基的量计算出各种成分所需

用量，选用精度合适的台秤准确称取各种成分。

(2)溶解：一般情况下，几种培养基成分可一起倒入烧杯内，然后加入少于所需要的水量，加热溶解。加热

溶解时要不断搅拌，待各成分完全溶解后，补足水分至所需配制的体积。如有磷酸盐和钙镁盐等混合在一起

时易产生沉淀，则要分别溶解，或将盐配成母液，另外配制有淀粉的培养基，应先将淀粉糊化。

(3)调节pH值：培养基配好后，先用pH试纸或pH计测出其原始

pH值，然后用1mol/LNaOH溶液或1mol/LHCl溶液调节至需要的pH。

(4)分装：

a.斜面培养基分装：量取所需体

积的液体培养基倒入烧杯中，加入1.5%~2.0%(w/v)琼脂，搅拌

均匀并加热使其完全融化，最后用热水补足因蒸发而损失的水分(注意在加热融化琼脂的过程

中要不断搅拌，以防琼脂沉淀而烧焦)。趁热分装于15X150mm试管中，每支试管加量约2~3ml。

b.半固体培养基分装：除了琼脂加量为0.5%~1.0%(w/v),其他同斜面培养基分装。趁热在

15Xl50mm试管中加入4ml培，养基。

c.液体培养基的分装：直接将配制好的培养基分装于15X50mm试管或250ml三角瓶中。

15X50mm试管装3~4ml,250ml三角瓶装25~100ml。

d.固体培养基三角瓶的分装：直接在三角瓶中按1.5~2.0%(w/v)加入琼脂，然后加入一定体积的

液体培养基。一般250ml三角瓶装100ml培养基。注意琼脂不必加热融化，因为在灭菌时琼脂会

融化的。

(5)加塞：试管口和三角瓶口塞上合适的棉塞或

硅胶塞。(图4-1)

图4-1棉塞(左：A正确，B、C错误)和硅胶塞(右)

(6)包扎

a.试管包扎：5~8支为一捆，

在棉塞外包一层牛皮纸，用棉线扎好。图4-2A

b.三角瓶的包扎：在棉塞外包一层牛皮纸，用棉线扎好。图4-2B

图4-2试管和三角瓶的包扎

(7)灭菌：将