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;
第一节免疫细胞化学原理★
第二节免疫细胞化学方法
;;免疫反应特异性表现在:
抗原作为一类结构复杂大分子能刺激机体
产生对其特异抗体并与抗体发生反应
抗体针对某种抗原分子而产生,特异地识
别该抗原并与其结合
;免疫细胞化学反应原理:;;抗原;;;抗原:
凡能刺激机体产生抗体并能与
抗体特异结合物质称为抗原
抗原性:
物质所含有这种特征称为抗原性
;
细胞中含有抗原性化学成份有:
蛋白质多肽脂蛋白多糖
脂多糖糖蛋白核蛋白
这些生物大分子都能用免疫细胞化学技术检测吗?
从生物学功效来看都包含了哪些物质?
;
酶、受体、抗体、细胞外基质
激素、细胞结构蛋白、病原体等
;
;Fab片段含有抗体活性,决定某种抗体
与抗原结合能力和特异性;免疫细胞化学技术中所用抗体有两种:
抗血清—多克隆抗体,是用提纯抗原
免疫动物后从动物血清制备得
到
单克隆抗体—是指由单个产生特异抗体
B淋巴细胞分化增殖形成
细胞克隆产生抗体
;
;
免疫荧光技术将荧光素作为标识物
使组织细胞中形成抗原抗体复合
物在荧光显微镜下可见,从而显示
抗原物质定位
;1.异硫氰酸荧光素2.四乙基罗达明
3.四甲基异硫氰酸罗达明4.藻红蛋白
▲分子量不一样▲最大吸收光谱不一样
▲最大发射光谱不一样▲与蛋白结合方式不一样
▲展现不一样荧光:黄绿色荧光
橙色荧光
橙红色荧光等
;
荧光:
在激发光(荧光显微镜提供)照射下,能发出较激发光波长更长可见光并随照射停顿而消失
荧光显微镜:
荧光显微镜光源提供各种激发光,如
紫外光、蓝紫光(有不一样波长范围)
使受检标本内荧光物质发光
;
是将酶作为标识物使组织细胞中形成抗原抗体复合物得到标识,再经过酶细胞化学反应产生显微镜下可见显色物质,间接显示抗原物质定位
;1.反应产物定位准确,颜色对比清楚
2.反应后标本材料可长久保留
3.能用于电镜观察
;;;;;;;2.碱性磷酸酶(Alkalinephosphotase,AKP);利用两种物质高度亲和力而相互结合定位特异分子
亲和物质含有多价能力物质,与亲和物质有高
度亲和力又能与抗体、蛋白质及各种标
记物(荧光素、酶、胶体金等)结合
最惯用亲和物质系统:
1、生物素(biotin)与亲和素(avidin)
二者结合能力为不可逆
2、葡萄球菌A蛋白与免疫球蛋白IgG
;
(1)标识亲和素-生物素技术
(Labeledavidinbiotin,LAB)
(2)桥式亲和素-生物素技术
(Bridgedavidinbiotin,BAB)
(3)亲和素-生物素-酶复合物技术
(Avidin-biotinperoxidasecomplex
method,ABC);;;
利用亲和素为桥梁
连接生物素化抗
体和生物素化酶
;亲和素-生物素-酶复合物技术;葡萄球菌A蛋(StaphylocalproteinA,SPA)
◆是金黄色葡萄球菌
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