中国药品检验标准操作流程分析.pptx

中国药品检验标准操作规程

年版;;1、对仪器普通要求;1.1色谱柱;填充剂性能（如载体形状、粒径、孔径、表面积、键合基团表面覆盖度、含碳量和键合类型等）以及色谱柱填充，直接影响供试品保留行为和分离效果。分析分子量小于化合物应选择孔径在15nm（1nm=10?）以下填料，分析分子量大于化合物则应选择孔径在30nm以上填料。

除另有要求外，普通分析柱填充剂粒径普通在3～10μm之间，粒径更小（约2μm）填充剂惯用于填装微径柱（内径约2mm）。;使用微径柱时，输液泵性能、进样体积、检测池体积和系统死体积等必须与之匹配；如有必要，色谱条件也需作适当调整。当对其测定结果产生争议时，应以品种项下要求色谱条件测定结果为准。

以硅胶为载体键合固定相使用温度通常不超出40℃，为改进分离效果可适当提升色谱柱使用温度，但不宜超出60℃。;流动相PH值应控制在2～8之间。当pH大于8时，可使载体硅胶溶解；当pH小于2时，与硅胶相连化学键合相易水解脱落。当色谱系统中需使用PH大于8流动相时，应选取耐碱填充剂，如采取高纯硅胶为载体并含有高表面覆盖度键合硅胶填充剂、包覆聚合物填充剂、有机-无机杂化填充剂或非硅胶基键合填充剂等；当需使用PH小于2流动相时，应选取耐酸填充剂，如含有大致积侧链能产生空间位阻保护作用二异丙基或二异丁基取代十八烷基硅烷键合硅胶填充剂、有机-无机杂化填充剂等。;1.2检测器;.紫外、荧光、电化学检测器为选择性检测器，其响应值不但与待测溶液浓度相关，还与化合物结构相关；蒸发光散射检测器和示差折光检测器为通用型检测器，对全部化合物都有响应；蒸发光散色检测器对结构类似化合物，其响应值几乎仅与待测物质量相关；二极管阵列检测器能够同时统计待测物吸收光谱，故可用于待测物光谱判定和色谱峰纯度检验。;紫外、荧光、电化学和示差折光检测器响应值与待测溶液浓度在一定范围内呈线性关系，但蒸发光散射检测器响应值与待测溶液浓度通常呈指数关系，故进行计算时，普通需经对数转换。;不一样检测器，对流动相要求不一样。如采取紫外检测器，所用流动对应符合紫外—可见分光光度法（《中国药典》年版二部附录ⅣA）项下对溶剂要求；采取低波长检测时，还应考虑有机相中有机溶剂截止使用波长，并选取色谱级有机溶剂。蒸发光散射检测器和质谱检测器通常不允许使用含不挥发盐组分流动相。;1.3流动相;各品种项下要求条件除固定相种类、流动相组成、检测器类型不得改变外，其余如色谱柱内径、长度、载体粒度、流动相流速、混合流动相各组成百分比、柱温、进样量、检测器灵敏度等，均可适当改变，以适应供试品并到达系统适用性试验要求。其中，调整流动相组分百分比时，以组分百分比较低者（小于或等于50%）相对于本身改变量不超出±30%且相对于总量改变量不超出±10%为限，如30%相对改变量数值超出总量10%时，则改变量以总量±10%为限。;对于必须使用特定牌号填充剂方能满足分离要求品种，可在该品种项下注明。;2、系统适用性试验;2.1色谱柱理论板数(n)。;2.2分离度（R）;2.3重复性;2.4拖尾因子（T）;3、测定法;;3.2外标法;3.3加校正因子主成份本身对照法;测定杂质含量时，按各品种项下要求杂质程度，将供试品溶液稀释成与杂质程度相当溶液作为对照溶液，进样，调整仪器灵敏度（以噪音水平可接收为限）或进样量（以柱子不过载为限），使对???溶液主成份色谱峰高约达满量程10％～25％或其峰面积能准确积分【通常含量低于0.5%杂质，峰面积相对标准偏差（RSD）应小于10%；含量在0.5%～2%杂质，峰面积RSD应小于5%；含量大于2%杂质，峰面积RSD应小于2%】。然后，取供试品溶液和对照品溶液适量，分别进样，供试品溶液统计时间，除另有要求外，应为主成份色谱峰保留时间2倍，测量供试品溶液色谱图上各杂质峰面积，分别乘以对应校正因子后与对照溶液主成份峰面积比较，依法计算各杂质含量。;3.4不加校正因子主成份本身对照法;若供试品所含部分杂质未与溶剂峰完全分离，则按要求先统计供试品溶液色谱图Ⅰ，再统计等体积纯溶剂色谱图Ⅱ。色谱图Ⅰ上杂质峰总面积（包含溶剂峰），减去色谱图Ⅱ上溶剂峰面积，即为总杂质峰校正面积。然后依法计算。;3.5面积归一法;4、注意事项;流动相普通贮存于玻璃、聚四氟乙烯等容器内，不能贮存在塑料容器中。因许多有机溶剂如甲醇、乙腈等可浸出塑料表面增塑剂，造成流动相受污染。贮存溶剂一定要盖严，以预防溶剂挥发引发组成改变，也预防氧和二氧化碳溶入流动相引发pH值改变，对分离或分析结果带来误差。磷酸盐、醋酸盐缓冲液轻易发霉变质，应尽可能新鲜配制使用。如确需贮存，可在冰箱内冷藏，并在3天内使用，用前应重新滤过。;4.2溶剂配制与保留;4.3色谱柱使