RNA提取标准操作规程.pdf

研究机构名称：中国药科大学药代动力学重点实验室

SOP编号：

SOP名称：RNA提取标准操作规程

1.目的

本SOP的目的是为了保证RNA提取实验的标准化和可重复性。

2.前言

本SOP涉及细胞及组织样品的RNA提取的标准化操作过程。

3.范围

本SOP适用于中国药科大学药代动力学重点实验室的全体实验操作人员。

4.职责

4.1细胞室PI应指派专人负责RNA提取实验前的培训。

4.2所有实验操作者应经由专人培训，明确RNA提取实验的原理及步骤后方可独立操作。

5.操作步骤

5.1实验前准备

RNA制备的关键是要抑制细胞中的RNA分解酶和防止所用器具及试剂中的RNA分解酶

的污染。因此，在实验中必须采取以下措施：戴一次性干净手套；使用RNA操作专用实验

RNA

台；在操作过程中避免讲话等以防止实验者的汗液、唾液中的分解酶污染。

5.1.1器具准备

RNA实验用的器具建议专门使用，不要用于其它实验。

尽量使用一次性塑料器皿，若用玻璃器皿，应在使用前按下列方法进行处理。

10.1%DEPC3712

（）用（焦碳酸二乙酯）水溶液在℃下处理小时。

212030DEPC

（）然后在℃下高压灭菌分钟以除去残留的。

5.1.2试剂配制：

（1）RNAisoPlus试剂购于TaKaRa，货号：D9108A

（2）氯仿

（3）异丙醇

（4）75%乙醇（DEPC处理水配制）

（5）RNase-free水（制备方法：使用RNase-free的玻璃瓶，向超纯水中加入DEPC至终浓度

0.1%（v/v），过夜搅拌后，高温高压灭菌。）

5.2实验操作

5.2.1

RNAisoPlus的使用量参考

样品量RNAisoPlus使用量（ml）

10cm2的贴壁培养细胞1

10712

的悬浮培养细胞～

100μl的白细胞2

100μl全血2

50～100mg的普通组织样品1

50～100mg的特殊组织样品（肝、脾、骨及软骨等）2

1530mg1

～的植物材料（多糖和多酚含量不高的）

5.2.2实验样品的研磨和匀浆。

A.贴壁培养细胞

①倒出培养液，用1×PBS清洗一次。

2

②每10cm生长的培养细胞中加入1ml的RNAisoPlus，水平放置片刻，使裂解液均匀分

布于细胞表面并裂解细胞，然后使用移液枪吹打细胞使其脱落（对于贴壁牢固的培养细胞可

用细胞刮勺剥离细胞）。

③将内含细胞的裂解液转移至离心管中，用移液枪反复吹吸直至裂解液中无明显沉淀。

④室温静置5分钟。

B.悬浮培养细胞

①悬浮培养细胞连同培养液一起倒入离心管中，8000g4℃离心2分钟，弃上清。

7

②每10个细胞中加入l～2ml的RNAisoPlus。

③用移液枪反