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TP53基因突变及其治疗方法

——AZD1775药理和临床试验综述

一、引言

免疫细胞会产生或接受抑制自身的蛋白小分子，称为免疫检查点。肿瘤细胞利用这种机制，抑制免疫细胞，从人体免疫系统中逃脱存活下来。免疫检查点抑制剂类药物，比如PD1/PDL-1单抗和CTLA-4单抗，可解除这种抑制作用，让免疫细胞重新激活工作，消灭癌细胞。

在细胞分裂过程中，也有一系列的检查点机制，称为细胞周期检查点。其中部分检查点相关的靶向药（比如P53和WEE-1相关）已进入癌症治疗的临床试验阶段。

要了解P53靶向工作原理，先介绍一些细胞周期和细胞周期检查点的基本知识。

细胞周期

细胞周期分4个阶段：

1）G1期:新陈代谢活跃，细胞生长，合成RNA和蛋白质，为进入S期做准备。G1期结束后可进入G0休止期或进入S期。

2）S期：?DNA复制合成。

3）G2期：细胞继续生长，合成各种蛋白准备分裂

4）M期：?细胞有丝分裂期，染色体分成2份，细胞分裂为2个子细胞，子细???

胞各获得一份完整DNA。此过程中，染色体的分配主要依赖于纺锤体

的作用。M期结束进入下一个细胞周期。

细胞周期检查点

由于细胞分裂是一个复杂的过程，多种监控性蛋白形成了一个完整系统来监视和控制细胞在整个生长周期的进展。细胞周期检查点（checkpoint）是一套保证DNA复制和染色体分配质量的检查机制。当细胞周期进程中出现异常事件，如DNA损伤或DNA复制受阻时，这类调节机制就被激活，及时地中断细胞周期的运行。待细胞修复或排除故障后，细胞周期才能恢复运转。

按时间顺序，可将检查点分为三类：

1）G1检查点：检查DNA损伤（damage），细胞大小，营养等。如果出现问题，进入G0休止期，否则进入S期。

2）G2/M检查点：检查DNA损伤（damage），DNA复制（replication）。如果出

现问题，细胞周期会等待修复或复制完成。如损伤无法修复，细胞可能凋亡或进入程序性死亡。

3）Metaphase检查点（纺锤体检查点）：检查姐妹染色单体是否正确的附着在

纺锤体微管上,以保证染色体的正确分配。

图1：细胞周期和细胞周期检查点

细胞周期蛋白（Cyclins）和细胞周期蛋白激酶（CDKs）

细胞周期蛋白是最重要的细胞周期调节机制之一，包含A、B、D、E、G及H型。不同Cyclin在不同细胞周期浓度不同，比如，CyclinD在G1期浓度较高。它们与蛋白质激酶（细胞周期蛋白依赖性激酶，cyclin-dependentkinases,CDKs）结合，并调节它们的酶活性，从而帮助推动和协调细胞周期的进行。当Cyclin和CDK相结合时，它们像开关一样，可以作用到目标蛋白质上，提高或降低其活跃程度。1970年代研究首次发现M期Cyclin和CDK1结合后会形成一种“催熟因子”，推动青蛙卵从G2期进入M期。

另外，Cyclin和CDK结合后的活性受到细胞内外各种因素的影响。正反馈因素会提高Cyclin/CDK活性，因而推动细胞周期进行。相反，负反馈因素降低Cyclin/CDK活性，甚至导致细胞周期停止。

图2：细胞周期蛋白（Cyclins）和细胞周期蛋白激酶（CDKs）

P53

铺垫了这么多，终于讲到P53了。

那么什么是P53？P53是一种细胞周期调节蛋白，可以控制细胞生长和监控DNA损伤。在出现DNA损伤情况下，它可以暂停细胞周期进程，并可能导致细胞凋亡。

癌症患者中TP53基因突变很常见，导致G1和G2检查点出现问题，不能及时修复癌细胞中的基因突变或使癌细胞凋亡。TP53也被称为抑癌基因、基因组守护者。

举个例子，假设紫外线导致细胞DNA受损（G1期）。P53在多层次发挥作用确保受损DNA不被传递到子细胞。P53首先激活CDK抑制蛋白的生成（CDKInhibitor,CKI），CKI蛋白和CDK-Cyclin结合会降低其活性，使细胞停留在G1期，等待DNA修复。P53的第二个任务就是激活DNA修复激酶。如果DNA没法修复，P53的第三个任务就是激活程序性死亡，保证受损DNA不被传下去。因此，如果P53出现问题或不工作，DNA变异会很快累积起来，并可能导致癌症。

另外，P53在G1和G2期均可引起细胞周期暂停并引起细胞凋亡（图3）。

图3：P53在DNA损伤情况在G1和G2期的通路

WEE-1：

之前提到P53可以在G1和G2期检查点发生作用。WEE-1络氨酸激酶主要在G2检查点起作用（图4）。当细胞处于G2期时，CDK1/CyclinB复合物可以诱导细胞进入有丝分裂。但是，WEE-1可以降低CDK1活性，导致G2周期暂停，等待DNA修复。

当P53出现问题后，DNA受损高度依赖于G2检查点的WEE-1激活以叫停G2从而进行DNA修复。AZD1775（MK1775