谷子茎尖体外遗传转化体系的建立与优化_杨澜.pdf

植物学报ChineseBulletinofBotany2021,56(1):71–79,

doi:10.11983/CBB20119

·技术方法·

谷子茎尖体外遗传转化体系的建立与优化

杨澜,刘雅,项阳,孙秀娟,颜景畏,张阿英*

南京农业大学生命科学学院,南京210095

摘要以谷子(Seteriaitalica)豫谷一号为实验材料,建立了一套简便、稳定的体外茎尖遗传转化体系。通过根癌农杆菌

(Agrobacteriumtumefaciens)介导的茎尖转化法,对转化受体采取不同的处理方式,待拟转化株长到三叶期后进行PCR鉴

定。探明了草丁膦(Basta)喷施处理用于谷子转基因幼苗筛选的最适浓度,以及2种不同检测方式(直接PCR和喷施

Basta+PCR)鉴定转基因植株的效果。在上述基础上,对影响谷子遗传转化体系的多种因素进行优化。结果表明,菌液浓度

(OD600)=1.4、侵染液中乙酰丁香酮浓度为800μmol·L–1、侵染压强为0.05MPa、侵染40分钟有利于谷子茎尖的遗传转化。

同时,采用上述优化系统获得谷子转SiCBL4基因植株,通过喷施草丁膦和实时荧光定量PCR对T2代转基因植株进行遗传

稳定性分析,可节约检测时间。综上,该研究初步建立了稳定的谷子体外茎尖遗传转化体系,并开发了一种便捷的检测后代

转基因植株的组合方法。

关键词谷子,遗传转化,草丁膦,体外,茎尖

杨澜,刘雅,项阳,孙秀娟,颜景畏,张阿英(2021).谷子茎尖体外遗传转化体系的建立与优化.植物学报56,71–79.

谷子(Seteriaitalica)是起源于中国的古老农作入受体,转化各种组织和器官,缺点是转化率不高,

物,在中国北方的驯化栽培历史悠久(刁现民和程汝易导致基因沉默且成本较高。农杆菌介导法不仅能够

宏,2017),具有抗旱性强、适应性广、营养丰富均衡完整稳定地表达外源基因,而且操作简单、成本低。

以及饲草蛋白含量高等特点(李顺国等,2012;宋利通常情况下,用于农杆菌介导的谷子遗传转化受体材

军,2019)。近年来,随着干旱愈发严重、畜牧业大力料包括愈伤组织、幼穗、幼胚及成熟胚等(王永芳等,

发展以及人们饮食习惯逐渐偏爱杂粮,谷子的市场需2003;陈倩楠等,2018;李颜方等,2019;Soodet

求量不断增加,其必将成为农业供给侧结构性改革的al.,2020),但这些受体材料均需进行组织培养,获得

重要方向之一(李顺国等,2014,2018)。受体时间较长且有较强的基因型依赖性。因此,近年

随着转基因技术的发展,通过遗传转化等技术提来以茎尖生长点为受体进行遗传转化的方法备受关

高作物产量和品质已成为一种广泛应用的途径。然而,注,已在玉米(Lietal.,2002;Maetal.,2018)、水稻

与水稻(Oryzasativa)和玉米(Zeamays)等主要农作(ArockiasamyandIgnacimuthu,2007;张笑寒等,

物相比,谷子功能基因研究相对滞后,其中一个主要2016)、高粱(Sorghumbicolor)(张明洲等,2006;

原因是谷子遗传转化体系发展较为缓慢。因此,建立Yellisettyetal.,2015)和珍珠粟(Pennisetumglau-

并进一步优化谷子遗传转化体系十分重要。cum)(Jhaetal.,2011)等多种禾本科植物中成功应

谷子遗传转化的方法有很多,主要包括基因枪用。其主要优点是不受季