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水中大肠菌群的测定
综合实验：题目
PAGE
水中大肠菌群的测定
报告题目
水中大肠菌群的测定
作者姓名
班级
生科1104班
指导教师
完成时间
2013年6月
生物学实验教学中心
目录
TOC\o1-3\u引言 2
1实验材料 2
2实验步骤 2
2.1 2
2.2 4
2.3 4
2.4 4
2.5数据分析与结果处理 错误!未定义书签。
3结果与分析 5
3.1图片 错误!未定义书签。
3.2 错误!未定义书签。
总结 6
参考文献 8
个，混匀37度培养24h。
2.3平板分离。
培养后产酸，产气或仅产酸的发酵管为阳性反应，否则为阴性。配制伊红美蓝培养液1200ml（每组取200ml），然后倒12个平板，分别将9支试管中的菌用画线法接种到培养基上，。再随机从3种浓度的菌液中随机取一管进行接种。37度培养24h。将培养基中的菌种挑取少许进行革兰氏染色，再做镜检。
革兰氏染色：将带有上述典型特征的菌落（在伊红美蓝平板上大肠杆菌群的典型菌落为深紫黑色，具有金属光泽；或者为紫黑色，不带或略带金属光泽；或者为紫红色、中心较深的菌落）做革兰氏镜检：将大肠杆菌菌落涂片，干燥，固定。然后加草酸铵结晶紫一滴，染色1分钟后倾去染液，水洗至流出水为无色。用卢戈氏碘液覆盖1分钟，倾去碘液，水洗至流出水为无色。再用滤纸吸去玻片上的残水，将玻片倾斜，并衬以白纸背景，用95%乙醇滴洗至刚刚无紫色为止，25S，然后立即用水冲去乙醇。将玻片上残留的水用吸水纸吸去，用番红复染液染色2分钟，水洗，吸去残水，晾干。干燥后，油镜观察。以分开的细菌颜色为准，革兰氏阳性菌呈紫色。阴性菌呈红色。
2.4复发酵。
配制100ml乳糖蛋白胨培养基，分装10管（每管均加入布氏小管），高温灭菌。将镜检结果为阴性的菌种对应的培养基上的菌种接种到乳糖蛋白胨培养基上，37度培养24h，仍产酸，产气的是大肠菌群阳性。
2.5结果计算。
根据三个稀释度中的阳性管数组成的一个数量指标，查表计算结果。
3结果与分析
1.大肠杆菌初发酵后的实验现象：
稀释度
0.1
0.01
0.001
管号
1
2
3
1
2
3
1
2
3
现象
气泡较多，溶液变黄
有气泡，溶液变黄
有气泡，溶液变黄
有气泡，溶液变黄
气泡较少，溶液变黄
2.伊红美蓝培养基的筛选后的实验现象：
稀释度
0.1
0.01
0.001
管号
1
2
3
4
1
2
3
4
1
2
3
4
镜检现象
阴
阴
阴
阴
阴
阴
阴
阴
阳
4阴
阴
阴
3.大肠杆菌复发酵的实验现象：
稀释度
0.1
0.01
0.001
阳性管数
3
3
2
大肠杆菌MPN
11000
实验分析：
大肠杆菌是一大类群的总称并不是哪一种的种名，这一类群中包括好多种，这些种中有的仅产酸有的既产酸又产气。大肠杆菌在伊红美蓝中菌落具有典型的特征，依据菌落的特征可以进行筛选再由革兰氏染色进行确认。本次实验中初发酵中现象均为阳性，在进行筛选中有6个培养皿中镜检为阴性，但镜检中发现大肠杆菌的密度很低。在复发酵的实验结果中培养一天各管并未产气且仅有一管产酸，可能是复发酵挑选的菌中大部分不是大肠杆菌，也有可能是菌浓度过低，还有可能是在挑菌是挑的太少或是在操作时不规范如在灼烧接种环时未待冷却使菌受到损伤或直接烧死了，这些均会是结果不理想。
总结
释10倍的水有3管大肠杆菌阳性菌，稀释100倍的水有3管，稀释1000倍的有2管即青山湖水中大肠杆菌的含量为MPN=11000.
实验内容与安排的建议、实验感受、实验改进想法等
操作分析
1、培养基的配制灭菌
1）在培养基分装过程中注意乳糖培养基与三倍乳糖培养基的量，其中三倍乳糖培养基是每管10ml,乳糖培养基每管5ml。
2）杜氏小管在倾斜的放入装有培养基的试管内出现了气泡，将试管倒立使气泡排空后再正放即可排除气泡。
3）在整理所需灭菌物品时，由于训练不足整体上还是有点混乱，不过能及时解决。
4）培养基的配制仪器的包扎与包装比较熟练，未出现问题。
2、水样采集及稀释，初发酵实验
1）用移液管移取菌液时，单手操作能力还是欠缺，总习惯性的把试管塞放到桌面上。在微生物实验过程中，最重要的就是要时刻保持无菌条件，因此一些试管塞应该放到手上而不是桌上。在打开每一个试管塞时应该将试管口在火焰上灼烧，操作时尽量距离酒精灯近一些。
2）移液管依然是用吸耳球吸取液体，由于无菌操作台的玻璃门开启幅度不能过高，以不超过下巴为宜，因此双手在操作台里操作很僵硬，受到限制，移取液体很不方便；多熟悉在无菌操作台条件下进行实验的环境并且要培养自己单手操作的能力，在无菌操作台里尽量避免用吸耳球辅助移液管移取液体，而是训练用口操作。
3）还是准备的不充足，在无菌操
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