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水质的细菌学检查
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水质的细菌学检查
一、目的要求
(一)学习水质的细菌学检查法
(二)了解水质状况同细菌数量的关系及大肠菌群的数量在饮水中的重要性。
二、基本原理
检测水中的细菌数量是评价水质状况的重要指标之一。饮水是否合乎卫生标准，需要进行水中细菌数量及大肠菌群数量的测定。大肠菌群是肠道最普遍存在和数量最多的一群细菌，由于大肠菌群是一群能发酵乳糖的革兰氏阴性、无芽孢杆菌，它们在乳糖培养基中经37℃
饮用水一般规定：1毫升自来水中总菌数不得超过100个；1000毫升自来水中大肠菌群数不得超过3个。
三、实验材料
培养基及器皿、牛肉膏蛋白胨培养基、乳糖蛋白胨发酵管（内倒置小管）、三倍乳糖蛋白胨发酵管（内倒置小管）、伊红美蓝琼脂培养基、无菌空瓶、无菌水、无菌培养皿、移液管、试管。
四、实验内客
(一)采取水样
1、自来水：从学校各生活区取样。先将自来水龙头用火焰灭菌,再开放水龙头使水流1—2分钟后，用无菌空瓶接取水样。
2、池水、湖水或河水：用无菌空瓶取距水面10—15厘米深层水样。水样采取后应立即检验，不得超过4小时。
(二）水中细菌总数测定
l、自来水：
稀释水样：原水样和10-1水样，用无菌移液管分别吸取l毫升原水样和10-1水样，分别注入二个无菌培养皿中。每皿各加13--15毫升已融化并冷却到45--50℃的牛肉膏蛋白胨培养基，轻轻旋转，使培养基与水样充分混匀，待凝固后，将平板倒置于37
制作培养基方法、消毒灭菌、接种、计数皆参照参微生物学实验指导，具体如下：
培养基制作：实验五、培养基的制备
培养基配方：附录二、常用培养基之一
培养基灭菌：实验六、灭菌与消毒
水样接种：实验七、土壤微生物的分离与测数
细菌总数测定：实验七、土壤微生物的分离与测数
2、池水、湖水或河水等。
稀释水样：稀释倍数视水样污浊程度而定，使水样培养后每个平板中的菌落数在30--300之间的的稀释度最为合适。例如：取湖水稀释成10-1、10-2、10-3。每个稀释度作两个培养皿，并依上法倾入培养基制成平板，培养，计数。
菌落计数方法：
（1）先计算同一稀释度的平均菌落数。若其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不应采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌落的大小不到培养皿的一半，而其余的一半菌落分布又很均匀时，则可将此一半的菌落数乘2代表全平板的菌数，然后再计算该稀释度的平均菌落数。
（2）首先选择平均菌落在30—300之间的平板，当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，则以该平均菌落数乘其稀释倍数即为该水样的细菌总数（见表1中例1）。
（3）若有两个稀释度的平均菌落数都在30--300之间，则按两者菌落总数之比值来决定。若其比值小于2则应取两者的平均数；若大于2则取其中较小的菌落总数（表1中例2及3）。
（4）若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数（表1中例4）。
（5）若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数（表1中例5）
（6）若所有稀释度的平均菌落数均不在30--300之间。则以最接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数（表一中例6）
表一计算菌落总数方法举例
例次
不同稀释度的平均菌落数
两个稀释度
菌落数之比
菌落数
10-1
10-2
10-3
1
2
3
4
5
6
1365
2760
2890
无数
27
无数
164
295
271
4650
11
305
20
46
60
513
5
12
1.6
2.2
1600或1.6*104
38000或3.8*104
27000或2.7*104
5.1*105
270或2.7*102
31000或3.1*104
(三）用发酵法检查大肠菌群
接种水样量(毫升)
每升水样中
大肠菌群数
10
1
0.1
0.01
-
-
-
-
-
-
-
+
-
+
+
+
+
+
+
+
-
-
-
+
-
+
+
-
+
-
-
-
+
+
+
+
-
-
+
-
+
-
+
-
+
-
+
+
-
-
+
+
-
+
-
-
+
+
-
-
+
+
-
+
-
+
-
+
90
90
90
95
180
190
220
230
280
920
940
1800
2300
9600
23380
23800
五、实验报告内容
我校各生活区水样中，细菌总数每毫升多少？经大肠菌群
检查每升水中含多少？水源被污染，出现什么情况？
在湖水（或河水）水样中细菌总数及大肠菌群数是多少？
不同区域取样有无区别，为什么？
六、思考题
大肠菌群中的细菌种类一般
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