生物化学实验电泳市公开课一等奖百校联赛特等奖课件.pptxVIP

;人员组成;试验内容安排;1试验目标

掌握蛋白质、酶、核酸、糖等主要物质分离、纯化和测定技术原理及方法；

掌握生物化学基本知识、基本理论及基本试验技能；

培养分析和处理问题能力以及严谨细致科学作风、创新能力等综合素质。;2经过生物化学试验应该做到;3.1试验统计

试验前写好试验预习汇报(钢笔和园珠笔)。

试验中应及时准确地统计(专用纸，事先在统计纸上设计好各种统计格式和表格）所观察到现象和测量数据。

试验统计要注意有效数字，如吸光度值应为“0.050”，而不能记成“0.05”。每个结果都要尽可能重复观察二次以上，即使观察数据相同或偏差很大，也都应如实统计，不得涂改。

试验中要详细统计试验条件，如使用仪器型号、编号、生产厂等；生物材料起源、试剂规格、试剂浓度等。;3试验统计与试验汇报;4试验成绩评分方法;生物化学试验技术理论;19，俄国科学家M.C.Jber首创了一个从绿叶中分离各种不一样颜色色素成份方法，命名为色谱法(Chromatography)，因为翻译和习惯原因．又常称为层析法。

80多年来，层析法不停发展，形式各种多样。50年代开始，相继出现了分配层析、离于交换层析、凝胶层析、亲和层析、吸附层析等。

几乎每一个层析法都已发展成为一门独立生化高技术，在生化领域内得到了广泛应用。;一、层析技术;1、层析技术原理;2、层析技术分类;3、惯用层析原理;128;纸层析;（2）离子交换层析;示意图（交换树脂表面）;示意图（离子交换过程）;示意图;（3）吸附层析;吸附层析示意图;（4）亲和层析;;（5）凝胶过滤;;电泳技术;一.电泳概念;二.电泳技术分类;三.电泳技术基本原理;2.影响电泳速度原因;四.几个常见电泳比较;五.聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳原理;五.聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳原理;五.聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳原理;五.聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳原理;5.盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳原理;5.盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳原理;A.样品浓缩效应;缓冲液成份及pH不连续性造成蛋白质样品浓缩效应示意图;E：每厘米电压降

E＝I(电流强度)/?(电导率)

E与电泳速度成正比

电泳开始后，因为快离子泳动率最大，在快离子后面形成一个离子浓度低低电导区，产生较高电位梯度，使蛋白质和慢离子加速移动，蛋白质样品被深入浓缩。

;E：每厘米电压降

E＝I(电流强度)/?(电导率)

E与电泳速度成正比

电泳开始后，因为快离子泳动率最大，在快离子后面形成一个离子浓度低低电导区，产生较高电位梯度，使蛋白质和慢离子加速移动，蛋白质样品被深入浓缩。

;A.样品浓缩效应;A.样品浓缩效应;A.样品浓缩效应;A.样品浓缩效应;A.样品浓缩效应;B.电荷效应;C.分子筛效应;试验一离子交换层析法分离氨基酸;离子交换层析法分离氨基酸;1、装柱;2、平衡;3、加样;4、洗脱与搜集;试验二SDS分离蛋白质;SDS分离蛋白质;;1.安装膜具;装封胶条，注意封胶条平面朝下，不能有裂口;盖上凹玻璃;将凹玻璃冲外装进槽里;将楔子插进，将底部插紧;2.配制凝胶溶液;插入梳子;胶凝后用夹子将玻璃夹出;用夹子夹紧玻璃将封胶条轻轻撕掉;旋转180度，凹玻璃向里;将玻璃放进槽内;加缓冲液;4.样品制备：

将0.5ml样品液，0.25ml10%SDS和0.25ml1%巯基乙醇于小试管中，置100℃水浴中煮沸3分钟后，取出冷却，然后，加入0.25ml上样缓冲液（0.05%溴酚兰+40%蔗糖溶液），混合。取出混合样品40微升加入样品槽，每个样品重复两个。

;5.加样;6.电泳;电泳：

接通电源，电流恒定为80mA，待溴酚兰指示剂移至离下端0.5cm（约3小时），切断电源，拔去插头，倒出电极缓冲液于大烧杯中（如此缓冲液欲重用时，应把正负电极液分别贮存）。;7.剥胶;8染色：

考马斯亮蓝染色，详见教材

9脱色;凝胶（脱色之后）结果分析;试验三DNS法测定还原糖;三、操作步骤;试验四多酚氧化酶制备、性质和影响原因;三、操作步骤;2、多酚氧化酶作用;3、多酚氧化酶化学性质;4、底物专一性;5、底物浓度影响;6、酶浓度影响;7、H+浓度影响;试验五碱性蛋白酶活力测定（福林－酚试剂法）;1、样品处理;三、操作步骤;三、操作步骤;试验六菜花中核酸分离与判定;三、操作步骤;三、操作步骤;试验七Bradford法测定蛋白质含量;三、操作步骤