强直性脊柱炎的实验室检测及其意义课件.ppt

强直性脊柱炎的实验室检测及其意义四川金域魏徵霄2014-02-08

内容提要：强直性脊柱炎特点及其与B27关系什么是HLA及HLA-B27MHC、HLA、亚型、关联、RRHLA-B27与哪些疾病相关HLA-B27怎么检测MLCT、ELISA、IMS-ELISA、FCM、PCR-SSP2

2024/6/24

强直性脊柱炎(AS)是一种慢性、进行性，中轴关节受累的关节病变，其中以骶髂关节和脊柱关节受累为主要临床表现。该病早期进展较慢，但后期发展较快，很短时间内形成驼背畸形，髋、膝等关节强直，故早期诊断显得尤为重要。

2024/6/24强直性脊柱炎的流行病学患病率我国0.3%高！（RA0.36%）发病年龄40岁以前发病高峰20-30岁男女比例10:1

强直性脊柱炎相关检测：HLA-B275强直性脊柱炎类风湿性关节炎地区分布种族差异大世界性性别分布男＞女女＞男年龄20-3030-50家族史明显不明显类风湿因子（－）（?）

AS与HLA-B276健康人群HLA-B27阳性率及AS患病率各地区、种族有显著的差异HLA—B27与强直性脊柱炎的发病有很强的相关性两种错误认识：HLA-B27阳性≠AS！HLA-B27阳性不会转阴！HLA-B27阳性率AS患病率AS患者B27阳性率中国人2-7%0.3%90～95%欧洲白种人4～13％1％80～100%南非黑人1％很低22%美国黑人2～4％57%印地安人9～50％6～12％80～100%

AS与HLA-B27的关联机制连锁不平衡学说分子模拟学说关节源性肽假说其他：

T细胞受体库假说

超抗原假说

B27修饰因子假说

Cys67模型7

HLA相关概念主要组织相容性抗原主要组织相容性复合体（MHCⅠⅡⅢ类)：H-2SLAHLAMHC、HLA复合体……基因MHC分子、HLA分子……抗原HLA：人类白细胞抗原（HumanLeukocyteAntigen）8

HLA相关概念9不同地区HLA-B27亚型的流行病学分布欧洲、非洲2705、2702、2707东南亚（印尼、马来西亚、泰国）2706、2704、2705中国、新加坡、日本2704、2705、2707

HLA-B27相关疾病10疾病HLA-B27阳性率(%)强直性脊椎炎90银屑病性关节炎?55Reiter’s综合症37反应性关节炎沙门氏菌感染29.7志贺氏菌感染20.7耶尔森氏菌感染17.6淋病双球菌感染14.0正常人群?2～7

HLA-B27检测方法及评价11

微量细胞毒法（microlymphocytotoxictest，MLCT）原理：如果受试者淋巴细胞表面表达有相应的HLA-B27抗原，就可以与B27抗体结合，形成Ag-Ab复合物激活补体，发生对细胞膜的破坏及细胞杀伤作用，通过染色法观察，死细胞的细胞膜通透性改变，染料能够进入使之着色，而活细胞细胞膜完整不被染色。根据死细胞占全部细胞的百分比，可以判断受试者淋巴细胞表面是否存在HLA-B27抗原及其与抗体的反应强度。优点：不需特殊仪器设备，易于操作，一般的实验室都可开展。缺点：标本存放不能超过8小时；感染可以使细胞膜表面的B27分子的数量或结构改变，影响MLCT的结果，易出现假阴性。12J.Kirveskari,etal.BritishJournalofRheumatology,1997,36:185-189

ELISA原理：应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中HLA-B27水平。用纯化的B27抗体包被微孔板，依次加入HLA-B27抗原（待检标本）、生物素化的抗HLA-B27抗体、HRP标记的亲和素，形成双抗体夹心反应，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的HLA-B27呈正相关。其结果与MLCT法符合率为99％，且不受感染因素的影响，重复性好。13瞿良等．实用医学杂志，2005,19(21):2190-2191

磁珠酶联免疫分析（IMS-ELISA）磁珠分离与ELISA结合

B27单抗标记磁珠

HRP标记CD45单抗

通过磁场分离游离相优点：反应时间短（1小时完成）对标本新鲜度要求不高2～8℃静置4d之内可用14杨雅琼等．现代检验医学杂志，2002,17(2):60-62

利用荧光标记的HLA-B27单克隆抗体，与细胞表面的B27抗原结合，使结合后的淋巴细胞具有一定的荧光强度，这种荧光强度可由流式细胞仪测得的通道值来反映，以其值的高低判断HLA-B27抗原表达百分比，从而判断HLA-B27是否阳性。优点：全自动仪器检测，减少了人为因素的影响