药物级别质粒DNA的制备方法.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利说明书

(10)申请公布号CN1882682A

(43)申请公布日2006.12.20

(21)申请号CN200480033865.2

(22)申请日2004.09.17

(71)申请人森特利昂公司

地址法国塞纳河畔维特里

(72)发明人弗朗西斯·布兰奇米歇尔·库德尼古拉斯·梅斯特拉利戴维·盖拉克蒂里·吉尔明

(74)专利代理机构北京市柳沈律师事务所

代理人巫肖南

(51)Int.CI

C12N1/06

C12N15/10

权利要求说明书说明书幅图

(54)发明名称

药物级别质粒DNA的制备方法

(57)摘要

本发明提供了对细菌悬浮液的连续

碱性裂解以收获pDNA的方法。进一步提

供了可选择的额外的纯化步骤，包括溶胞

产物过滤、阴离子交换层析、三联体亲和

层析和疏水性相互作用层析。这些可选择

的纯化步骤可以与连续裂解组合，以生产

基本上没有gDNA、RNA、蛋白质、内毒

素和其他污染物的高度纯化的pDNA产

品。

法律状态

法律状态公告日法律状态信息法律状态

权利要求说明书

1.一种用于裂解细胞的装置(mechanism)，包括：

a)湍流设备，用以快速地混合细胞悬液与可裂解细胞的溶液；和

b)层流设备，用以允许在基本上没有搅动的情况下保温(a)中形成的混合物，

其中在(a)中形成的混合物从湍流设备流动到层流设备中。

2.权利要求1的装置，另外包括用于添加中和所述裂解性溶液的第二溶液的设备，

其中在(b)中保温的混合物从所述层流设备流动到所述用于添加第二溶液的设备中。

3.利用根据权利要求2的装置从细胞分离质粒DNA的方法，包括：

a)在所述湍流设备中混合细胞与碱性裂解性溶液；和

b)通过添加酸性溶液中和所述碱性裂解性溶液。

3.连续碱性细胞裂解装置(device)，包括：

-第一混合器或注射器，能够按与所述细胞悬液相反的方向注射碱性流体；

-小直径的第一管道，用以在混合物内产生湍流；

-大直径的第二管道，用以在混合物内产生层流；

-第二混合器或注射器，用于在一端注射中和溶液并在另一端收获混合物。

4.权利要求3的装置，其中选择所述管道和注射器的直径以控制湍流和层流中的所

述混合物的流速。

5.权利要求3或4的连续碱性细胞裂解装置，进一步包括泵，用于注射或泵送所述

细胞悬液从而以相反方向接触所述第一混合器。

6.权利要求3到5的任何一项的装置，其中所述第一混合器或注射器是管路(in-line)

混合器或注射器。

7.权利要求3到6的任何一项的装置，其中所述第一混合器是T形管。

8.权利要求3到7的任何一项的装置，其中所述细胞悬液和碱性溶液的混合物以湍

流的形式短时间流过所述第一管道。

9.权利要求3到8的任何一项的装置，其中所述第一管道具有低于1cm、优选在2

和8mm之间、更优选约6mm的直径，以及1到10m、优选2到6m的长度。

10.权利要求3到9的任何一项的装置，其中所述混合物在1到10秒、优选2到5

秒、更优选2.5秒的期间经历湍流。

11.权利要求3到10的任何一项的装置，其中所述第二管道是螺管(coiledtubing)，

能够产生层流以容许所述碱性溶液和细胞悬液的连续接触，并确保完全的细胞裂解。

12.权利要求3到11的任何一项的装置，其中连续接触的持续时间为30秒到2分

钟，优选1分钟到1分30秒，优选1分20秒。

13.权利要求3到12的任何一项的装置，其中所述第二管道具有低于1cm、优选为

10到20mm、或12.5到19mm、更优选等于16mm的直径，以及5到30m、优选

13到23m的长度。

14.权利要求