实验九细胞内蛋白质的分布与显示.pptVIP

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2024-07-02 发布于浙江
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实验九细胞内蛋白质的分布与显示.ppt

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实验九细胞内蛋白质的显色与分布(必做，综合性实验，4学时）实验目的掌握原位显示细胞内酸性、碱性蛋白质的方法并了解细胞内蛋白质的一般分布酸、碱性蛋白质的显示及分布组织经三氯乙酸处理后可将核酸（DNARNA）抽提掉，细胞内保留下组蛋白和其它蛋白，组蛋白为碱性蛋白，其它蛋白呈酸性为酸性蛋白。蛋白质为两性电解质，在较其等电点为碱性环境中，蛋白质本身带阴电荷，在较其等电点为酸性环境中，蛋白质本身带阳电荷，组蛋白的等电点约8.5，酸性蛋白的等电点约4.6—6.75，固绿为酸性染料，其色素离子带阴电荷，在pH2.2时，组蛋白和酸性蛋白均带阳电荷，均可以与固绿色素离子结合而着色。在pH8.0时，组蛋白带有阳电荷，仍然可以与固绿色素离子结合着色，而酸性蛋白带有阴电荷，不能与固绿的色素离子结合，不能显色。实验材料及试剂仪器：显微镜水浴锅材料：洋葱鳞茎试剂：10%甲醛；5%三氯乙酸；0.1%固绿（pH2.2和pH8.0）；磷酸缓冲液（pH2.2和pH8.0）；蒸馏水固绿染色法示细胞内总蛋白固绿染色法示细胞内碱性蛋白实验报告要求摘要及关键词前言材料和方法结果与分析参考文献**实验原理实验流程洋葱鳞茎内表皮10%甲醛固定15min蒸馏水洗3次（吸去水)5%三氯乙酸90oC15min用蒸馏水轻缓洗涤至无气味0.1%固绿染色5min（pH8.0）0.1%固绿染色5min（pH2.2）缓冲液(pH8.0)洗30s缓冲液(pH2.2)洗30s制片镜检制片镜检实验结果经固绿（pH2.2）染色后,细胞质和细胞核均呈绿色经固绿(pH8.0)染色后,只有细胞核被染成绿色