一种建立由自然杀伤细胞介导的肝炎动物模型的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利说明书

(10)申请公布号CN1624112A

(43)申请公布日2005.06.08

(21)申请号CN200410065621.4

(22)申请日2004.11.05

(71)申请人中国科学技术大学

地址230026安徽省合肥市金寨路96号

(72)发明人田志刚董忠军魏海明

(74)专利代理机构合肥华信专利商标事务所

代理人余成俊

(51)Int.CI

C12N5/06

权利要求说明书说明书幅图

(54)发明名称

一种建立由自然杀伤细胞介导的肝

炎动物模型的方法

(57)摘要

本发明建立由自然杀伤细胞(NK细

胞)介导的肝炎模型的方法，特征是选择一

种病毒模拟物聚肌胞(PolyIC)以7.5－20微

克/克体重剂量，通过腹腔注射或静脉注射

6－8周龄纯系BALB/c或C57BL/6J小鼠，

PolyIC注射后12－24小时血清丙氨酸氨

基转移酶和天门冬氨酸氨基转移酶显著升

高，肝脏组织学出现肝细胞点状坏死，局

部炎性细胞浸润，肝内NK细胞比例及绝

对数升高。该模型的建立为系统研究肝炎

的发病机制以及筛选有价值的护肝药物及

疗效观察提供有力的工具。

法律状态

法律状态公告日法律状态信息法律状态

权利要求说明书

1、一种建立由自然杀伤细胞介导的肝炎动物模型的方法，其特征在于包括以下步

骤：

(1)、从纯系小白鼠、纯系B6小鼠、纯系严重联合免疫缺陷病小鼠、纯系裸鼠或纯

系分化抗原1d缺陷小鼠中选择至少一组小鼠；

(2)、用无菌PH7.0磷酸盐缓冲溶液配制终浓度为1毫克/毫升的聚肌胞溶液，封装

备用，-20℃保存；

(3)、对每种品系小鼠分别腹腔注射或静脉注射上述聚肌胞溶液，每克体重剂量范

围为7.5-20μg；

(4)、摘取聚肌胞注射后12-24小时小鼠的眼球，收集血液后分离血清，做血清丙氨

酸氨基转移酶和天门冬氨酸氨基转移酶检测；同时收集小鼠肝脏标本，做苏木精/

伊红染色后，显微镜观察肝脏组织学变化：血清丙氨酸氨基转移酶和天门冬氨酸氨

基转移酶升高至60-200国际单位/升，肝脏组织学出现肝细胞点状坏死，局部炎性

细胞浸润，则肝炎模型建立成功。

说明书

技术领域：

本发明属肝脏免疫学和实验动物学技术领域，具体涉及建立由自然杀伤细胞(NK细

胞)介导的肝炎动物模型的方法。

背景技术：

肝炎是严重危害人民生命健康且死亡率较高的一种疾病，病因主要包括病毒感染、

过度酒精摄入和服入化学毒物等造成肝脏实质细胞的破坏，其致病机制复杂。其中

肝脏免疫损伤备受关注，特别是肝脏淋巴细胞参与的病理损伤已经成为多种肝炎发

病机制中至关重要的事件。研究淋巴细胞如何参与肝脏损伤将有助于了解肝炎的致

病机制，将促进肝脏疾病的预防及治疗。由于人体肝脏标本的缺乏以及体外研究的

局限性，建立系列由免疫细胞介导的肝炎模型模拟人类肝脏疾病将是首选方法。美

国《临床调查杂志》(JournalofClinicalInvestigation，1992；90：196-203)报道了由

刀豆蛋白(concanavalinA)诱导的肝炎模型，该模型是将刀豆蛋白以15微克/克体重

(μg/g.wt)静脉注射BALB/c小鼠(中文简称小白鼠)，所致的肝脏损伤是T细胞依赖

的。美国《美国国家科学院进展》

(ProceedingsoftheNationalAcademyofSciences.USA.2000；97：5498-5503)报道

了自然杀伤T细胞(NKT细胞)通过Fas配体(FasL)介导的细胞毒活性参与刀豆蛋白

诱导的肝炎模型；美国《美国病理学杂志》(AmericanJournalofPathology.200