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(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利说明书
(10)申请公布号CN101475929A
(43)申请公布日2009.07.08
(21)申请号CN200910071296.5
(22)申请日2009.01.19
(71)申请人东北林业大学;詹亚光
地址150040黑龙江省哈尔滨市香坊区和兴路26号
(72)发明人詹亚光范桂枝尹静王博由香玲齐凤慧曾凡锁
(74)专利代理机构
代理人
(51)Int.CI
C12N5/04
C12P7/40
权利要求说明书说明书幅图
(54)发明名称
一种利用白桦悬浮培养生产齐墩果
酸的方法
(57)摘要
一种利用白桦悬浮培养生产齐墩果
酸的方法。该方法是以白桦成树一年生枝
休眠芽、展叶芽和种子为材料,接种于
WPM+6-BA1mg/L培养基中获得白桦无
菌苗,再以无菌苗茎段和叶片为外植体,
在培养基IS上诱导获得稳定、快速生长的
愈伤组织,最后在B5培养基,激素为
0.1~0.4mg/L6-BA和0.01~0.1mg/LTDZ
的培养基中进行悬浮细胞系的培养,蔗糖
为20g/L,pH值为6.0~6.5,接种量鲜重
为30~50g/L。23~25℃,110~130转
/min,光照8~10h/d,光照强度1400~
1700Lx,15天继代1次,多次继代培养后
获得稳定的白桦悬浮培养细胞系。经高效
液相色谱法检测,获得的白桦恳浮培养细
胞中齐墩果酸含量可达到0.217~
0.714mg/g(干重)。本发明是第一次在白桦
植物中通过细胞工程方法生产齐墩果酸,
此方法周期短,成本低,能节省大量人
力、物力、提高劳动生产率,为解决天然
植物药物来源紧缺和工业化大规模生产齐
墩果酸药物提供了一种新途径。
法律状态
法律状态公告日法律状态信息法律状态
权利要求说明书
1、一种通过白桦悬浮培养生产齐墩果酸的方法,其特征在于包括以下步骤:
1)通过常规方法培养获得白桦愈伤组织;2)将愈伤组织在B5悬浮培养基上培养。
pH6.5,250mL三角瓶,装100mL培养基,121℃高压蒸汽灭菌
20min。旋转摇床中震荡培养,每个悬浮培养继代周期后,培养
物过筛,将单细胞和小细胞团,分装在含新鲜液体培养基的培养瓶中继续培
养获得悬浮细胞系;3)高效液相法检测齐墩果酸含量。
2、根据权利要求书1所述的方法,其特征在于接种量为3g~5g/100mL,转速
120rpm/min,培养温度为24~26℃,光照强度1000~1500Lx,
光/暗周期为16h/8h,湿度60%~70%。
3、根据权利要求书1所述的方法,其特征在于添加的激素为0.1~0.4mg/L6-BA和
0.01~0.1mg/LTDZ。
4、根据权利要求书1所述的方法,其特征在于悬浮细胞系接种后15天收获。
5、根据权利要求书1所述的方法,其特征在于悬浮细胞系多次继代后,平均细胞
增殖仍达到4~8倍,齐墩果酸含量可达到0.217~0.714mg/g(干
重)。
说明书
技术领域
本发明属于生物工程领域,具体涉及一种由悬浮法培养白桦而生产齐墩果酸的方法。
背景技术
早在《本草纲目》中有记载,桦树皮可用于黄疸、乳痛、疥疮等疾病的治疗。在民
间桦树皮还用于治疗慢性痢疾及清热解毒、止咳、平喘等。随着研究发现,
桦树皮的主要药用成分是次生代谢类三萜物质,
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