DNA重组技术的基本工具.pptx

武汉加油！

中国加油！！

在家认真学习就是对国家的最大支持;期待我们能够早日战胜疫情，在校园相见！;期待我们能够早日战胜疫情，在校园相见！;为了棉花姓“中国”;为了棉花姓“中国”;2017年10月13日,农业部种子管理局副局长吴晓玲在回答媒体提问时表示,目前中国自主选育的转基因棉花品种市场份额占到95%以上,国外品种不到5%。;基因工程;1.简述DNA重组技术所需三种基本工具的作用。

2.认同基因工程的诞生和发展离不开理论研究和技术创新。;一;什么是基因工程？;基因工程的理论基础：（课本P2）;基因工程的理论基础：（课本P2）;;;基因工程的技术发展：（课本P2-3）;抗虫棉的培育有哪些关键操作步骤？;思考：解决培育抗虫棉的关键步骤需要哪些分子工具呢？;01;自主学习：;DNA重组技术的基本工具：;二、DNA重组技术的基本工具

1.限制性核酸内切酶——“分子手术刀”

(1)主要来源:原核生物。

(2)作用:能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列,并且使每条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。

(3)结果:形成DNA片段。限制酶切割DNA分子产生的DNA片段末端有两种形式,即黏性末端和平末端。;一;3.基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”

(1)载体的条件

①能够在受体细胞中自我复制。

②有一至多个限制酶切割位点,便于外源基因的插入。

③具有标记基因,供重组DNA的鉴定和选择。

④在宿主细胞内友好借居,不影响宿主细胞的生命活动。

⑤分子大小应合适,以便提取和体外操作。

(2)载体的种类

①质粒是一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外、能够自我复制的小型双链环状DNA分子。含有一个至多个限制酶切割位点,供外源基因插入其中,并带有特殊的标记基因,是基因工程最常用的载体。

②λ噬菌体的衍生物

③动植物病毒;一、限制性核酸内切酶（阅读课本P4-5，完成下表）;原核生物易受自然界外源DNA的入侵，但生物在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机制，以防止外来病原体的侵害。限制酶就是细菌的一种防御性工具，当外源DNA侵入时，会利用限制酶将外源DNA切割掉，以保证自身的安全。所以，限制酶在原核生物中起到切割外源DNA、使???失效的作用，从而达到保护自身的目的。因为限制酶识别DNA的特定核苷酸序列，所以不会伤害到自身的遗传物质。（课本P4“寻根问底”）;限制酶;仔细观察以下四种限制酶识别的特定序列有何特点？;【反馈练习】;两种常用的限制酶：EcoRⅠ和SmaⅠ;;SmaⅠ：;③什么是黏性末端和平末端？这两种末端是如何形成的？;……G;练习使用EcoRI剪切目的基因;练习使用EcoRI剪切目的基因;要想获得某个特定性状的目的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性(平)末端？

如果把两种来源不同的DNA用同种限制酶来切割，会怎样？;基因的针线：DNA连接酶;;;;判断以下说法是否正确：;;判断以下说法是否正确：;比较区分：DNA连接酶和DNA聚合酶（课本P6“寻根问底”）;根据所学知识，完成以下填空：

①限制酶②解旋酶③DNA连接酶④DNA聚合酶⑤RNA聚合酶;三、基因进入受体细胞的载体（阅读课本P6，完成下表）;三、基因进入受体细胞的载体（阅读课本P6，完成下表）;质粒——基因工程中常用的基因载体（课本P6）;【反馈练习】;【反馈练习】;题型一限制酶及其作用特点

【例1】下列有关基因工程中限制酶的叙述,正确的是()

A.限制酶只能识别6个或8个脱氧核苷酸组成的序列

B.限制酶的活性受温度的影响

C.限制酶能识别和切割RNA

D.限制酶只能从原核生物中提取

解析:限制酶能够识别并切割双链DNA上特定的核苷酸序列,多数限制酶能够识别由6个核苷酸组成的序列,少数可以识别由4,5或者8个核苷酸组成的序列。限制酶的化学本质是蛋白质,活性受温度影响。限制酶主要从原核生物中获得,同时在某些真核生物(如酵母菌)细胞内也存在。

答案:B;题型二DNA连接酶及其作用特点

【例2】下列有关DNA连接酶的叙述,正确的是()

A.T4DNA连接酶只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间连接起来

B.E·coliDNA连接酶能将双链DNA片段平末端之间进行连接

C.DNA连接酶能恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键

D.DNA连接酶可连接DNA双链的氢键,使双链延伸

解析:DNA连接酶能使两个DNA片段之间形成磷酸二酯键,从而将它们连接起来。E·coliDNA连接酶只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间连接起来,不能将双链DNA片段平末端之间进行连接。而T4DNA连接酶既可以“缝合”双链DNA片段互补的黏性末端,又可以“缝合”双链DNA片段的平末端。

答案:C;题型三基因