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实验三 叶绿素含量的测定

一．实验原理：

根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比。

叶绿素在652nm(混合）、663nm、645nm有最大吸收峰。根据在分光光度计下测定的吸光度，求得叶绿素的含量。

二。实验材料与实验器具：

植物材料：女贞、海桐叶片

实验器具：分光光度计；电子天平；研钵；试管；小漏斗；滤纸；吸水纸；移液管；量筒；剪刀

试剂：95％乙醇（或80％丙酮）；石英砂；碳酸钙粉三。操作步骤

称取剪碎的新鲜样品0.1g左右，放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙粉及3～5ml95％乙醇，研成均浆，继续研磨至组织变白。静置3～5min。

取滤纸1张，置漏斗中，用乙醇湿润，沿玻棒把提取液倒入漏斗中，过滤到10ml试管中，用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次，最后连同残渣一起倒入漏斗中。

用滴管吸取乙醇，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入漏斗中。直至滤纸和残渣中无绿色为止。最后用乙醇定容至10ml，摇匀。

把叶绿体色素提取液倒入光径1cm的比色杯内。以95％乙醇为空白，在波长663nm、645nm下或652nm测定吸光度。

计算公式：

叶绿素的含量（mg/g）= [(O.D652/34.5)×提取液体积×稀释倍数]/样品鲜重（或干重）。

Ca=13.95A663－6.88A645；Cb=24.96A645－7.32A663

四．实验结果

女贞：叶绿素的含量（mg/g）=0.932/34.5*10/0.119=2.270冬青: 叶绿素的含量（mg/g）=0.886/34.5*10/0.104=2.469