《植物组织培养》课件——项目四 无菌操作.pptxVIP

植物组织培养;项目四无菌操作;【知识点】

掌握外植体选择的原则

【技能点】

会正确选择外植体

素质要求：培养学生无菌意识、创新意识、团队合作意识和生态环保意识；具有任务执行力，规范操作、注意安全；科学严谨、实事求是的工作态度。

;细胞全能型;一、培养材料的选择;1、再生能力强的健壮植株

外植体必须有良好的增殖能力，在培养中筛选增殖能力最强的材料。

筛选不同基因型植物所需的特殊培养基。;通常年幼组织比年老组织有较高的形态发生能力，容易培养，有较大的再生能力。

植物上部器官的生长时间短，但生理年龄较老。而越往基部则生理年龄越小。;模块三;2、最佳时期

三点因素：材料、时间和污染因素。

取材料季节和时间，对离体培养至关重要。

处于生长季节，较幼嫩的外植体培养容易。;2、最佳时期

秋冬季取材需要处理。春季取材含菌数少，??季、雨季、湿热季节取材不容易灭菌成功。;3、选择优良的种质

优良的种质是成功的第一步。

选择具有明确的种性特征，优良单株、优良无性系、新品种、良种材料作为取出植株。并观察其遗传稳定性、花色、果型、长势等性状表现。;观察其遗传稳定性、花色、果型、长势等性状表现。;观察其遗传稳定性、花色、果型、长势等性状表现。;观察其遗传稳定性、花色、果型、长势等性状表现。;观察其遗传稳定性、花色、果型、长势等性状表现。;观察其遗传稳定性、花色、果型、长势等性状表现。;4、适宜部位，容易消毒

来源于幼年植物的外植体比源于成年树的外植体容易培养。

;同株植物中，较低部位外植体要比上不的外植体容易启动，培养成功可能性大。;植物体的各个部位，如茎尖、茎段、皮层及维管组织、髓细胞、表皮、块茎的贮藏薄壁细胞、花瓣根叶子鳞茎、胚珠和花药等。

;

茎尖是较好的部位，生长速度快，遗传性稳定，又能获得无病毒苗的重要途径。;叶片能保证多数植物的组织培养不会引起不良变异。

对于培养较困难的植物，可以通过子叶或下胚轴来建立起组织培养再生体系。;5、大小适宜

外植体的表面积、体积、细胞数量会影响培养效果。

;选择0.5-1cm左右。太大易污染，太小不易启动或启动后仅产生愈伤组织。

茎尖、胚、胚乳等培养，按器官或组织单位切离。;二、外植体的种类;模块三;分化的器官组织：

嫩茎、嫩叶、形成层、根、花瓣、花萼、珠心、种子等。

分化的器官组织可经诱导过渡到脱分化状态。

有些器官直接形成不定芽或体细胞胚。;花粉及雌配子体中的单倍体细胞：

——染色体数目减半，经秋水仙素加倍可产生多倍体。;三、减少外植体带菌的措施;2、外植体取材时间

——晴天比阴雨天好。

——下午比早晨好。;3、取样组织选择

——深层（内部的分生组织）比表面和浅层组织好。;小结;【知识点】

掌握外植体处理的一般方法

【技能点】

会正确处理外植体

素质要求：培养学生无菌意识、创新意识、团队合作意识和生态环保意识；具有任务执行力，规范操作、注意安全；科学严谨、实事求是的工作态度。

;外植体处理分为预处理和表面消毒，它是组培是否成功的第一关键步骤。;一、外植体的预处理

外植体在接种前先要灭菌，在灭菌前，又先要进行预处理。植物材料一般采取的预处理方法是，先对植物组织进行修整，去掉不需要的部分，将准备使用的植物材料在流水中冲洗干净。;1.常用的外植体修整方法

茎尖、茎段:剪除枝条上的叶片、叶柄及刺、卷须等附属物，软质枝条用软毛刷蘸肥皂水刷洗，硬质枝条用刀刮除枝条表面的蜡质、油质、茸毛等，枝条剪成带2-3个茎节的茎段。;

叶片:叶片带油脂、蜡质、茸毛等可用毛笔蘸肥皂水刷洗，较大叶片可剪成若干带叶脉的叶块。

;果实、种子、胚乳:直接冲洗消毒。对种皮较硬的种子可去除种皮、预先用低浓度的盐酸浸泡或机械磨损。;1）对采来的植物材料进行适当的修剪处理。除去不需要的部分，将所需的部分切割至适当大小。

;2）用洗衣粉水（每100ml水1-2角匙洗衣粉）等浸洗植物材料约5min，用毛刷进行刷洗一边材料，再用自来水冲净洗衣粉水。这是进一步减少污染的处理。;3）将清洗好的材料置于自来水下流水冲洗几分钟至几小时，主要以植物材料的清洁程度而定。对于污染严重时特别有效。;二、外植体表面消毒;2.外植体特征

外植体材料来源于不同环境，带菌程度不同，灭菌难易程度和灭菌效果有明显差别。

温室试材较田间的材料容易。

新生嫩芽比老枝捎的芽容易。

春季抽出的新芽灭菌效果好，污染率低。;3.常用消毒剂

;原理：使用化学药品直接作用于微生物引起蛋白质变性，将其杀死的方法。

常用化学灭菌试剂：

一定浓度的：84消毒液、双氧水、漂白粉、次氯酸钠、升汞、酒精、来苏水、高锰酸钾、抗生素等。;84消毒液（稀释2-10倍）：84消毒液是一种有效地杀菌剂，较常用。;漂白粉（1-10%滤液）：漂白粉是一种有效的杀菌剂，但应避光、干燥保存。;双