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用傅立叶红外光谱鉴别微生物的方法
专利名称::用傅立叶红外光谱鉴别微生物的方法
技术领域:
:本发明涉及用傅立叶红外光语鉴别微生物的方法。更具体
地说,涉及一种用傅立叶红外光镨建立微生物鉴别模型并使
用该模型鉴别药品中的微生物、例如污染菌的方法。
背景技术:
:药品中微生物的检定是药品质量检验的重要项目,该检验
结果的准确性直接决定其可信性。其中,微生物污染的检验
首先应能确认是否存在致病微生物。很多时候,还需进一步
确定所存在的致病微生物的种类。通常情况下,药典,例如
中国药典,要求对药品进行微生物限度检查(包括污染菌数
测定和控制菌检查),规定的控制菌检查包括大肠埃希菌、
大肠菌群、沙门菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌和梭菌。
药典中对于以上六种控制菌的检定方法主要为选择性培养
基结合颜色反应和生化反应来加以鉴别。该鉴定方法,也就
是所谓的传统方法存在着培养基复杂、鉴定程序繁瑣、鉴别
周期长(需3-7天或更长)的缺陷,且鉴定结果带有一定主观
性。另外,由于该类方法对于每一种细菌的鉴定并无通用的
方法,难以实现自动化及计算机化。其他鉴定方法还有分子
生物学方法,例如PCR、DNA(G+C)mol。/。值、DNA-DNA同
源性分析、16SrRNA序列同源性分析等。这些方法的特异性
好,灵敏度高,但需要专业人员完成,难以在普通实验室推
广。在此情况下,需要一种能够对药品中是否存在污染微生
物进行快速、准确的鉴别并且操作简便的鉴别方法。
发明内容本发明的目的是克服现有技术中存在的缺陷,提供
一种快速、准确、操作简便的微生物鉴别方法。本发明提供
一种用傅立叶红外光谱(FTIR)鉴别微生物的方法,该方法包
括如下步骤a)培养对照微生物;b)采集对照微生物的红外图
谱;c)在3000-2800cm1和1800至700cm1区间内的一个或
多个谱段建立微生物鉴别模型;d)在与步骤a)中相同的条件
下培养待测微生物;e)在与步骤b)中相同的条件下采集待测
微生物的红外图镨;i)将步骤e)中获得的红外图镨代入微生
物鉴别模型中确定待测微生物的归属。本发明的方法不仅可
以用于药品中的污染微生物鉴定,也可以用于例如食品等其
他领域的微生物鉴定。可被鉴别的微生物包括但不限于上述
药典规定的六种菌以及与这些菌种在分类学上相近的菌种,
例如以下的具体实施方式中提及的微生物。本发明的方法能
够实现快速鉴別,对待鉴别微生物的分类不需要用其他分类
学方法进行预选择;方法特异性强,分类能按科、属、种等
单位进行,甚至能够区分到亚种、血清型水平;一旦建立了
鉴别模型,鉴定微生物的成本极低。图l表明肠杆菌科的DNA
相关性,数字代表相关%;图2是本发明实施例1中采用的
聚类分析鉴别方法及具体参数;图3是本发明实施例1的定
性分析鉴别方法中的内部图镨最大匹配值直方图4是实施例
2中同时采用本发明的聚类分析鉴别方法和定性分析鉴别方
法的一种具体程序和结果判断方法;图5是实施例2中同时
采用本发明的聚类分析鉴别方法和定性分析鉴别方法的另
一种具体程序和结果判断方法;图6表明本发明方法对沙门
氏菌在种以下进行的区分。具体实施例方式本发明中提及的
术语具有本领域技术人员已知的含义。本发明中的约意味
着在所述数值±5%范围内的数值也被包括在本发明中。本方
法中使用的微生物来自CMCC:中国医学细菌管理保藏中心
(NationalCenterformedicalculturecollections)、CSAR:
国家细菌耐药性监领J中心
(NationalCenterforSurveillanceofAntimicrobialResist
ance)和CGMCC:中国普通微生物菌种保藏管理中心
(ChinaGeneralMicrobiologicalCultureCollectionCenter)
。1.对照微生物的选择及对照微生物、待测微生物的培养和
处理l.l对照微生物的选择用于建立鉴别模型的对照微生物
的种类包括待测微生物的种类,以及在红外光i普法鉴别过
程中易于与其混淆误判的其他微生物种类,例如,在系统分
类学中与待测微生物亲缘关系较近的其他微生物,且其种类
归属明确。在确定对照微生物种类后,选择该微生物类别中
尽可能多种类的微生物,采集其红外光谦数据用于建立鉴别
模型。
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