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用傅立叶红外光谱鉴别微生物的方法

专利名称：：用傅立叶红外光谱鉴别微生物的方法

技术领域：

：本发明涉及用傅立叶红外光语鉴别微生物的方法。更具体

地说，涉及一种用傅立叶红外光镨建立微生物鉴别模型并使

用该模型鉴别药品中的微生物、例如污染菌的方法。

背景技术：

：药品中微生物的检定是药品质量检验的重要项目，该检验

结果的准确性直接决定其可信性。其中，微生物污染的检验

首先应能确认是否存在致病微生物。很多时候，还需进一步

确定所存在的致病微生物的种类。通常情况下，药典，例如

中国药典，要求对药品进行微生物限度检查(包括污染菌数

测定和控制菌检查)，规定的控制菌检查包括大肠埃希菌、

大肠菌群、沙门菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌和梭菌。

药典中对于以上六种控制菌的检定方法主要为选择性培养

基结合颜色反应和生化反应来加以鉴别。该鉴定方法，也就

是所谓的传统方法存在着培养基复杂、鉴定程序繁瑣、鉴别

周期长(需3-7天或更长)的缺陷，且鉴定结果带有一定主观

性。另外，由于该类方法对于每一种细菌的鉴定并无通用的

方法，难以实现自动化及计算机化。其他鉴定方法还有分子

生物学方法，例如PCR、DNA(G+C)mol。/。值、DNA-DNA同

源性分析、16SrRNA序列同源性分析等。这些方法的特异性

好，灵敏度高，但需要专业人员完成，难以在普通实验室推

广。在此情况下，需要一种能够对药品中是否存在污染微生

物进行快速、准确的鉴别并且操作简便的鉴别方法。

发明内容本发明的目的是克服现有技术中存在的缺陷，提供

一种快速、准确、操作简便的微生物鉴别方法。本发明提供

一种用傅立叶红外光谱(FTIR)鉴别微生物的方法，该方法包

括如下步骤a)培养对照微生物；b)采集对照微生物的红外图

谱；c)在3000-2800cm1和1800至700cm1区间内的一个或

多个谱段建立微生物鉴别模型；d)在与步骤a)中相同的条件

下培养待测微生物；e)在与步骤b)中相同的条件下采集待测

微生物的红外图镨；i)将步骤e)中获得的红外图镨代入微生

物鉴别模型中确定待测微生物的归属。本发明的方法不仅可

以用于药品中的污染微生物鉴定，也可以用于例如食品等其

他领域的微生物鉴定。可被鉴别的微生物包括但不限于上述

药典规定的六种菌以及与这些菌种在分类学上相近的菌种，

例如以下的具体实施方式中提及的微生物。本发明的方法能

够实现快速鉴別，对待鉴别微生物的分类不需要用其他分类

学方法进行预选择；方法特异性强，分类能按科、属、种等

单位进行，甚至能够区分到亚种、血清型水平；一旦建立了

鉴别模型，鉴定微生物的成本极低。图l表明肠杆菌科的DNA

相关性，数字代表相关％;图2是本发明实施例1中采用的

聚类分析鉴别方法及具体参数；图3是本发明实施例1的定

性分析鉴别方法中的内部图镨最大匹配值直方图4是实施例

2中同时采用本发明的聚类分析鉴别方法和定性分析鉴别方

法的一种具体程序和结果判断方法；图5是实施例2中同时

采用本发明的聚类分析鉴别方法和定性分析鉴别方法的另

一种具体程序和结果判断方法；图6表明本发明方法对沙门

氏菌在种以下进行的区分。具体实施例方式本发明中提及的

术语具有本领域技术人员已知的含义。本发明中的约意味

着在所述数值±5%范围内的数值也被包括在本发明中。本方

法中使用的微生物来自CMCC:中国医学细菌管理保藏中心

(NationalCenterformedicalculturecollections)、CSAR:

国家细菌耐药性监领J中心

(NationalCenterforSurveillanceofAntimicrobialResist

ance)和CGMCC:中国普通微生物菌种保藏管理中心

(ChinaGeneralMicrobiologicalCultureCollectionCenter)

。1.对照微生物的选择及对照微生物、待测微生物的培养和

处理l.l对照微生物的选择用于建立鉴别模型的对照微生物

的种类包括待测微生物的种类，以及在红外光i普法鉴别过

程中易于与其混淆误判的其他微生物种类，例如，在系统分

类学中与待测微生物亲缘关系较近的其他微生物，且其种类

归属明确。在确定对照微生物种类后，选择该微生物类别中

尽可能多种类的微生物，采集其红外光谦数据用于建立鉴别

模型。