- 1、本文档共41页,可阅读全部内容。
- 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
第16章基因诊疗王慧莲基因诊断培训讲义第1页
概述几乎全部疾病均在一定程度上与基因有某种联络,基因改变,或是疾病发生原因,或是疾病发生结果,或是疾病发生时伴随现象,而这些现象出现是有规律。所以,能够经过检测基因改变来反应疾病发生和发展,疗效和预后基因诊疗:是以DNA或RNA为诊疗材料,经过检验基因存在、缺点或表示异常,对人体状态和疾病作出诊疗方法和过程。基因诊断培训讲义第2页
基因诊疗经历了三个基本发展阶段第一阶段:20世纪80年代,以DNA分子杂交为基础,经过限制性片段长度多态性性(RFLP)分析进行.第二阶段:应用PCR技术.第三阶段:应用基因芯片技术.基因诊断培训讲义第3页
第一节基因诊疗基础技术一.基因诊疗中惯用几个技术(一)核酸杂交(二)PCR(三)DNA序列测定(四)DNA芯片技术基因诊断培训讲义第4页
(一)核酸分子杂交技术(1)方法:以已知次序核酸片段作为探针,经放射性或非放射性物质标识后,再与未知目标核酸片段进行杂交反应,分离已杂交和未杂交标识核酸链,经过标识信号检测就能够对未知目标核酸链进行定性、定量分析.(2)几个不一样形式核酸分子杂交a.Southern印迹(southernblot)杂交:用于DNA检测,可用于基因限制性内切酶谱分析,基因突变分析等.b.Northern印迹(Northernblot)杂交:用于RNA检测,能对组织细胞中总RNA或mRNA进行定性和定量分析.c.斑点杂交(dotblot):既能够检测DNA也能够检测RNA,用于特定基因及其表示定性和定量分析.方法简单、灵敏;但特异性低. 基因诊断培训讲义第5页
原位杂交(insituhybridization):是细胞学技术与核酸杂交技术结合一个核酸分析检测技术.可分为DNA原位杂交和RNA原位杂交,用于检测染色体中特定基因位置,用于染色体疾病诊疗.分类:①玻片原位杂交:如中期染色体和组织切片.②膜上原位杂交:将菌落或噬菌斑影印在尼龙膜(如硝酸纤维膜)基因诊断培训讲义第6页
原位杂交镜像图基因诊断培训讲义第7页
(二)PCR技术在基因诊疗中应用(1)等位基因特异性寡聚核苷酸(allelespecificoligonnucleotide,ASO)探针斑点杂交:PCR-ASO该方法是诊疗已知点突变:需分别合成野生型和突变型探针.在基因诊疗时,只需用PCR扩增受检者目标DNA片段,再分别与上述探针杂交.杂交结果有以下几个情况:①PCR扩增产物与正常探针杂交,不与突变探针杂交--不存在这种突变;②只与突变探针杂交--突变基因为纯合子;③与正常探针和突变探针都可杂交--突变基因为杂合子;④与正常探针和突变探针都不能杂交--突变基因不属于已发现类型基因诊断培训讲义第8页
(2)单链构象多态性(singlestrandconformationploymorphism,SSCP)分析是一个基于单链DNA构象差异来检测点突变方
法.DNA变性形成单链,在中性条件下长度相同单
链指DNA,假如碱基组成和(或)排列次序不一样,形成
构象就不一样,这么就形成了单链构象多态性.这些分子在非变性PAGE中电泳中表现出不一样迁移率.
SSCP尤其适于分析小于400bpPCR产物。据认为SSCP能够区分1bp差异
PCR-SSCP分析不能确定基因变异内容,所以电泳后结果有差异后还需进行测序分析,确定变异性质
基因诊断培训讲义第9页
(3)限制性片段长度多态性(restrictionfragmentlengthpolymorphisms,RFLP)分析基因突变造成基因碱基组成或(和)次序发生改变,会在基因结构中产生新限制性内切酶位点或使原有位点消失.用限制酶对不一样个体基因组进行消化时,其电泳条带数目和大小就会产生改变,依据这些改变能够判断出突变是否存在.基因诊断培训讲义第10页
限制性片段长度多态性RFLPs(restrictionfragmentlengthpolymorphisms)样品一样品二1987年,H.Donis-Keller等人以RFLP为遗传标识绘制了第一张人类遗传图谱基因诊断培训讲义第11页
(4)PCR+变性梯度凝胶电泳分析技术双链DNA在一定浓度变性剂(尿素,甲酰胺)作用下,会变性而解链,造成DNA分子电泳迁移率改变.当在不一样梯度浓度变性胶中电泳时,DNA泳动到变性剂浓度能使DNA发生变性,DNA开始解链
文档评论(0)