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检测分析方法验证报告
报告编号:xxxxxxxx
方法名称：xxxxxxxxx
验证人员：xxxxxx
审核人员：xxx
验证日期：xxxx年xx月xx日
xxxxxx有限公司
水质粪大肠菌群的测定多管发酵法
一、方法依据
本方法依据《水质粪大肠菌群的测定多管发酵法》（HJ347.2-2018）用多管发酵法测定水中粪大肠菌群，适用于地表水、地下水、生活污水以及工业废水的粪大肠菌群测定。
本方法的检出限为，12管法为3CFU/L；15管法为20MPN/L。
二、方法原理
将待测样品加入含乳糖蛋白胨培养基的试管中，37℃初发酵富集培养，大肠菌群在培养基中生长繁殖分解乳糖产酸产气，产酸能够使溴甲酚紫指示剂由紫色变为黄色，产气则由倒管指示。将初发酵中产酸产气的试管进行复发酵接种，44.5℃复发酵培养，复发酵培养基中的胆盐三号能够抑制革兰氏阳性菌生长，最后产气的细菌确定为粪大肠菌群。通过查MPN表，得出粪大肠菌群浓度值。
样品采集时可加入硫代硫酸钠溶液消除活性氯对样品的干扰，或加入乙二胺四乙酸二钠溶液消除重金属离子对样品的干扰。
参加验证的人员情况登记表
姓名
性别
年龄
职务或职称
所学专业
从事相关分析工作年限
使用仪器情况登记表
仪器名称
规格型号
仪器出厂编号
性能状况（计量/校准状态，量程，灵敏度）
备注
使用试剂及溶剂登记表
名称
生产厂家
规格
纯化处理方法
备注
乳糖蛋白胨培养液
广东环凯微生物科技有限公司
250g/瓶
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EC培养基
广东环凯微生物科技有限公司
250g/瓶
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大肠埃希氏菌
广东环凯微生物科技有限公司
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产气肠杆菌
广东环凯微生物科技有限公司
生理盐水
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0.85%
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三、分析步骤
3.1样品稀释及接种
3.1.115管法
3.1.1.1本次15管法选用的待检样品为xx水源水，其接种量分别为10mL、1mL、0.1mL、,在5支装有已灭菌的5mL三倍乳糖蛋白胨培养基的试管中，按无菌操作要求各加入样品10mL，在5支装有已灭菌的10mL单倍乳糖蛋白胨培养基的试管中，按无菌操作要求各加入样品1mL，在5支装有已灭菌的10mL单倍乳糖蛋白胨培养基的试管中，按无菌操作要求各加入1：10稀释样品1mL。在做10倍梯度稀释时，按无菌操作吸取10mL充分混匀的待稀释样品，加入到盛有90mL无菌水的三角瓶中。
3.1.1.2阳性试验：挑取一粒大肠埃希氏菌（ATCC25922）磁珠置于BHI液体培养液中，24h培养，使之菌悬液浓度在109CFU/mL，用无菌生理盐水按照10倍系列稀释法，稀释至10-7至10-8。本方法选用10-7大肠埃希氏菌作为阳性菌株，其接种量为10mL、1mL、0.1mL。在5支装有已灭菌的5mL三倍乳糖蛋白胨培养基的试管中，按无菌操作要求各加入10-7大肠埃希氏菌稀释液10mL，在5支装有已灭菌的10mL单倍乳糖蛋白胨培养基的试管中，按无菌操作要求各加入10-7大肠埃希氏菌稀释液1mL，在5支装有已灭菌的10mL单倍乳糖蛋白胨培养基的试管中，按无菌操作要求各加入10-8大肠埃希氏菌稀释液1mL。在做10倍梯度稀释时，按无菌操作吸取10mL充分混匀的待稀释样品，加入到盛有90mL无菌水的三角瓶中。
3.1.1.3阴性试验：挑取一粒产气肠杆菌（ATCC13048）磁珠置于BHI液体培养液中，24h培养，使之菌悬液浓度在109CFU/mL，用无菌生理盐水按照10倍系列稀释法，稀释至10-7至10-8。本方法选用产气肠杆菌作为阴性菌株，其接种量为10mL、1mL、0.1mL。在5支装有已灭菌的5mL三倍乳糖蛋白胨培养基的试管中，按无菌操作要求各加入产气肠杆菌稀释液10mL，在5支装有已灭菌的10mL单倍乳糖蛋白胨培养基的试管中，按无菌操作要求各加入产气肠杆菌稀释液1mL，在5支装有已灭菌的10mL单倍乳糖蛋白胨培养基的试管中，按无菌操作要求各加入1：10产气肠杆菌稀释液1mL。在做10倍梯度稀释时，按无菌操作吸取10mL充分混匀的待稀释样品，加入到盛有90mL无菌水的三角瓶中。
3.1.1.4空白组采用无菌水进行接种。吸取1mL无菌水加入到10mL单倍乳糖蛋白胨培养基的试管中。
3.1.212管法
3.1.2.1本次12管选用的待检样品为xx水源水，在2支装有已灭菌的50mL三倍乳糖蛋白胨培养基的大试管中，按无菌操作要求各加入待检样品100mL，在10支装有已灭菌的5mL三倍乳糖蛋白胨培养基的试管中，按无菌操作要求各加入待检样品10mL。
3.1.2.2本方法选用10-7大肠埃希氏菌作为阳性菌株，在2支装有已灭菌的50ml三倍乳糖蛋白胨培养基的大试管中，按无菌操作要求各加入大肠埃希氏菌稀释液100mL，在10支装有已灭菌的5mL三倍乳糖蛋白胨培养基的试管中，按无菌操作要求各
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