切割运载体和含有目的基因的DNA片段专家讲座.pptx

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构想1;把这么奇思妙想变为现实是20世纪70年代兴起高新科技——基因工程。;基因工程概念;基因工程概念;抗虫棉;基因工程培育抗虫棉简明过程:;实现上述步骤需要哪些工具?;主要是从原核生物中分离纯化出来一个酶。能将外来DNA切断,因为这种切割作用是在DNA分子内部进行,故名限制性核酸内切酶。;4、特点:;寻根问底;;T;;大肠杆菌一个限制酶EcoRI,能识别GAATTC序列,并在G和A之间切开。;;什么叫黏性末端?;什么叫平末端?;1、要想取得某个特定性状基因必须要用限制酶切几个切口?可产生几个黏性末端?;基因针线──DNA连接酶;二、DNA连接酶——“分子缝合针”;阅读课文:;DNA聚合酶只是将一个个脱氧核苷酸加到DNA单链上(DNA复制);而DNA连接酶是将两个DNA片段缺口连接起来(基因工程)。;;…GAATTCCGTAGAATTCGGATT…;;

;一、基因工程概念.

二、DNA重组技术基本工具

1.限制性核酸内切酶---”分子手术刀”

2.DNA连接酶---”分子缝合针”

;以下是两种限制酶切割后形成DNA片段,试分析:

①GC…②AATTC…③…GC④…CTTAA

CG…G……CG…G

(1)其中①和是由一个限制酶切割形成末端,

二者要重组成一个DNA分子,所用DNA连接酶通常是。

(2)和是由另一个限制酶切割形成末端,

二者要形成重组DNA片段,所用连接酶通常是。;三、基因进入受体细胞载体—分子运输车;假如目标基因导入受体细胞后不能复制将怎样?

作为载体没有切割位点将怎样?

目标基因是否进入受体细胞,我们肉眼看不到,怎样判定?

假如载体对受体细胞有害将怎样?我们敢选取从霍乱弧菌中质粒来做载体吗?

;作为载体必要条件:;质粒特点:;;练习;;DNA重组技术基本工具:;限制酶所识别序列有什么特点?

限制酶所识别序列,不论是6个碱基还是4个碱基,都能够找到一条中心轴线,中轴线两侧双链DNA上碱基是反向对称重复排列。

限制酶识别序列中心轴线

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