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微生物学实验报告

土壤微生物的分离、培养及鉴定

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土壤微生物的分离、培养及鉴定

摘要：本实验是微生物学综合性实验项目包含了微生物学实验使用的微生物分离和纯化、

微生物的选择培养基、培养基的制备、高压蒸汽灭菌、微生物类群的主要培养特征和形

态特征、制片染色技术等。[1]

土壤是微生物的良好生境，土壤中有多种类群的微生物，它们对自

然界物质的转化和循环起着极为重要的作用，对农业生产和环境保护有着不可忽视的影响。根际微生

物与植物的关系特别密切，不同的土壤和植物对根际微生物产生显著影响，而不同的根际微生物由于

其生理活性和代谢产物的不同，也将对土壤肥力和植物营养产生积极或消极的作用。土壤微生物不仅

对土壤的肥力和土壤营养元素的转化起着重要作用，而且对于进入土壤中的农药及其他有机污染物的

自净、有毒金属及其化合物在土壤环境中的迁移转化等都起着极为重要的作用。

关键词：土壤微生物，分离鉴定，生理生化，

1前言

土壤中微生物的数量因土壤类型、季节、土层深度与层次等不同而异。一般地说，

在土壤表面，由于日光照射及干燥等因素的影响，微生物不易生存，离地表10cm～30cm

的土层中菌数最多，随土层加深，菌数减少。

土壤是微生物生活的大本营，是寻找和发现有重要应用潜力的微生物的主要菌源。

不同土样中各类微生物数量不同，一般土壤中细菌数量最多，其次为放线菌和霉菌。一

般在较干燥、偏碱性、有机质丰富的土壤中放线菌数量较多。本实验从土壤中分离细菌、

放线菌和霉菌。

为了分离和确保获得某种微生物的单菌落，首先要考虑制备不同稀释度的菌悬液。

各类菌的稀释度因菌源、采集样品的季节、气温条件而异。其次，应考虑各类微生物的

不同特性，避免样品种各类微生物相互干扰。细菌或放线菌在中性或微碱性环境较多，

但细菌比放线菌生长快，分离放线菌时，一般在制备土壤稀释液时添加10％酚或在分离

培养基中加相应的抗生素以抑制细菌和霉菌。

培养基是指利用人工方法将适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的各种营养物质混

合配制而成的营养基质，主要用于微生物的分离、培养、鉴定、菌种保藏等方面。自然

界中微生物种类繁多，营养类型多样，加之实验和研究的目的不同，所以培养基种类很

多。不同培养基一般都应含有微生物生长繁殖所需的碳源、氮源、能源、无机盐、生长

因子和水等营养成分。此外，为了满足微生物生长繁殖的要求，还必须控制培养基的pH

值。

牛肉膏蛋白胨培养基是一种用于培养细菌的培养基，属于半合成培养基。高氏一号

培养基是一种用于培养放线菌的合成培养基。马丁氏培养基用于霉菌的分离培养。

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2材料与药品

2.1材料

（1）菌源

选定采土地点后，铲去表涂层2～3cm，取3～10cm深层土壤10g。

（2）培养基

肉膏蛋白胨培养基、马丁氏培养基、高氏合成一号培养基

（3）无菌水

（4）其他用品

无菌培养皿、无菌移液管、玻璃涂棒、天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧

杯、量筒、锥形瓶、培养皿、pH试纸、棉花、纱布、牛皮纸、线绳、报纸等。

2.2药品

牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、可溶性淀粉、琼脂、黄豆芽、链霉素溶液、1％重铬酸钾、

NaCl、KNO、KHPO、MgSO、FeSO、KHPO、MgSO•7HO、NaOH溶液（1mol/L）。

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3实验方法

3.1培养基的配制

3.1.1肉膏蛋白胨培养基的配制

（1）培养基成分

牛肉膏0.3g

蛋白胨1g

NaCl0.5g

琼脂1.5