免疫细胞分离及其表面标志检测技术.pptx

免疫细胞分离及其表面标志检测技术免疫细胞分离及其表面标志检测技术第1页

第二节淋巴细胞标志及亚群分类一、?Ｔ细胞表面标志及亚群二、B细胞表面标志三、?NK细胞表面标志第三节其它免疫细胞第四节免疫细胞表面标志检测及应用一、??免疫细胞表面标志检测方法二、?淋巴细胞表面标志检测临床意义思索题小结免疫细胞分离及其表面标志检测技术第2页

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第一节免疫细胞分离外周血单个核细胞分离淋巴细胞分离T细胞和B细胞分离T细胞亚群分离免疫细胞分离及其表面标志检测技术第4页

一、外周血单个核细胞分离外周血单个核细胞（peripheralmononuclearcells,PMNC）包含淋巴细胞和单核细胞（monocyte）。Ficoll分离液法主要用于分离外周血中单个核细胞，是一个单次差速密度梯度离心分离法。免疫细胞分离及其表面标志检测技术第5页

细胞分离基础原理不一样细胞密度不一样不一样细胞表面生物学特征不一样不一样细胞表面分化抗原不一样免疫细胞分离及其表面标志检测技术第6页

不一样细胞密度不一样人红细胞密度为1.093粒细胞密度为1.092单个核细胞（淋巴细胞和单核细胞）密度为1.075-1.090免疫细胞分离及其表面标志检测技术第7页

不一样细胞密度不一样免疫细胞分离及其表面标志检测技术第8页

用1.077±0.001分层液可将细胞分离免疫细胞分离及其表面标志检测技术第9页

密度梯度离心(Ficoll)离心免疫细胞分离及其表面标志检测技术第10页

二、淋巴细胞分离贴壁粘附法吸附柱过滤法磁铁吸引法Percoll分离液法（连续密度梯度离心）（去单核细胞）免疫细胞分离及其表面标志检测技术第11页

E花环沉降法尼龙毛柱分离法三、T细胞和B细胞分离免疫细胞分离及其表面标志检测技术第12页

四、T细胞亚群分离亲和板结合分离法磁性微球分离法荧光激活细胞分离仪分离法免疫细胞分离及其表面标志检测技术第13页

荧光激活细胞分离仪分离法免疫细胞分离及其表面标志检测技术第14页

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磁珠大小能够选择免疫细胞分离及其表面标志检测技术第16页

大小免疫磁珠分离细胞特点比较比较项目大磁珠小磁珠对细胞影响对细胞造成机械压力，影响其生物学活性，不利于分离后培养。对细胞温和，不影响分离细胞后续培养。对流式细胞仪影响阻塞流式细胞仪喷嘴，影响散射光。可直接上流式细胞仪检测，不影响散射光。分离条件要求技术简单，分离可在试管中完成。需要很强磁场来分离细胞。收率得率高。得率不高。纯度纯度低。纯度高。分离时间分离速度快。分离速度慢。分离成本成本低。需要很强磁场来分离细胞，需要一次性分离柱，不能在普通试管进行。免疫细胞分离及其表面标志检测技术第17页

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免疫磁珠法细胞分选过程免疫细胞分离及其表面标志检测技术第20页

免疫磁珠细胞分选装置免疫细胞分离及其表面标志检测技术第21页

全自动细胞分选系统免疫细胞分离及其表面标志检测技术第22页

流式细胞分析仪免疫细胞分离及其表面标志检测技术第23页

第二节淋巴细胞标志及亚群分类常见于判定和检测淋巴细胞表面标志是簇分化抗原（Clusterofdifferentiation，CD）。免疫细胞分离及其表面标志检测技术第24页

细胞表面分化抗原（CD抗原）适合用于T、B细胞分离已知CD抗原细胞亚群分离未知CD抗原细胞亚群分离（阴性分选）免疫细胞分离及其表面标志检测技术第25页

一、T细胞表面标志及其亚群CD3+CD4+CD8-辅助性T细胞（helpTcell,Th）CD3+CD4-CD8+细胞毒性T细胞（cytotoxicTcell,TcorCTL）CD4+CD25+调整性T细胞（regulatoryTcell,TrorTreg）免疫细胞分离及其表面标志检测技术第26页

二、B细胞表面标志SmIg、Fc受体、补体受体、EB病毒受体，个别CD分子是B细胞主要表面标志，其中以SmIg为B细胞所特有，是判定B细胞可靠指标。CD19/CD5分子：可将B细胞区分为B1细胞和B2细胞，B1细胞为CD19和CD5双阳性，而B2细胞仅为CD19阳性，B2细胞为通常所指B细胞。免疫细胞分离及其表面标志检测技术第27页

三、NK细胞表面标志人类NK细胞表面标志主要以CD16、CD56来认定，临床上将CD3-CD56+CD16+淋巴细胞认定为NK细胞。免疫细胞分离及其表面标志检测技术第28页

T细胞及NK细胞免疫细胞分离及其表面标志检测