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氨磷汀对免疫性血小板减少性紫癜动物模型小鼠的干预作用

[摘要]目的探讨氨磷汀对免疫性血小板减少性紫癜（itp）动

物模型小鼠血小板、脾脏系数、骨髓巨噬细胞的影响。方法通过

获取balb/c小鼠血小板抗体，接种到豚鼠身上，获取豚鼠抗小鼠

血小板抗体（aps）。将aps腹腔注射balb/c小鼠建立免疫性血小

板减少性紫癜动物模型，使用氨磷汀腹腔注射进行治疗，观察氨磷

汀对模型小鼠的血小板、脾脏系数、骨髓巨噬细胞的影响。结果氨

磷汀给药后均使itp模型小鼠血小板计数上升、脾脏系数减少、骨

髓成熟巨核细胞增多，与模型组比较差异有统计学意义（p1.3豚

鼠抗血小板抗血清的制备

参考文献的方法[6-7]，取健康balb/c小鼠，摘眼球取血，静置

半个小时，800rmp/min离心10min，取上层血清1500rmp/min

离心15min，取上层血清900rmp/min离心10min，取上层血清

3000rmp/min离心10min，弃去血清，得底部沉淀血小板，加入

1%草酸氨1ml，静置5min，3000rmp/min离心10min，弃去上

层液体，底部血小板用生理盐水洗涤3次，用生理盐水稀释到浓度

为1～2×109/l，分别与弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂按1∶1混

合成弗氏完全佐剂血小板抗原混合物与不弗氏完全佐剂血小板抗

原混合物，备用；取健康豚鼠8只，于第1周注射弗氏完全佐剂血

小板抗原混合物于其四肢、腹股沟、背部、皮下，每处注射100μl，

于第2、3、4周注射同剂量的不弗氏完全佐剂血小板抗原混合物。

第4周末用20%乌拉坦2ml腹腔注射麻醉豚鼠，心脏取血。1500

rmp/min离心10min，取上层血清，余下全血继续3000rmp/min

离心10min。合并2次所得血清，得豚鼠抗小鼠血小板血清aps，

-20℃保存，备用。自制直径9cm琼脂糖平板，用打孔器打成梅花

形孔，中间孔滴加血小板悬液（500×109/l），周围孔加1∶2、1∶

4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64不同效价的豚鼠抗小鼠血小板血清。

37℃温箱孵育24h观察沉淀弧，检测抗血清效价。

1.4模型的制备及分组给药[8-9]

取60只雌雄各半的健康balb/c小鼠，随机分为5组，每组12

只，分别为氨磷汀高剂量组、低剂量组、模型组、正常组和阳性对

照组。取出-20℃保存aps，于56℃水浴30min灭活补体，用生理

盐水稀释到1∶4的效价，小鼠进行腹腔注射。于0、2、4、6、8、

10d按照100μg/20g小鼠腹腔注入稀释的抗血清，每2天重复注

射1次，以维持血小板的持续降低。

从第1次注射aps后，以120mg/kg剂量腹腔注射作为高剂量组，

以60mg/kg剂量腹腔注射作为低剂量组，每日1次，连续给药10d，

强的松龙组，以2.25mg/kg剂量腹腔注射作为阳性对照组剂量组，

模型组及空白对照组给予生理盐水。

第10天给药后2h，摘眼球取血，检测血小板计数；解剖取出脾

脏，称重，计算脾脏系数；剥离股骨，取出骨髓涂片，瑞士染色法，

染色，计算巨核细胞的分类数。

1.5统计学处理

应用spss15.0统计软件进行统计分析，计量资料用（）的形式

表示，采用t检验，p[4]范辉，朱宏丽，李素霞，等.氨磷汀治

疗17例特发性血小板减少性紫癜[j].中国实验血液学杂志，2008，

16（1）：192-196.

[5]靳英，李明阳，刘波，等.氨磷汀在治疗特发性血小板减少

性紫癜中的作用[j].医学与哲学，2012，33（