微生物实验思考题.docxVIP

显微镜使用：

如何提高显微镜视野中的光照强度？

答：显微镜中光照强弱是由显微镜的光学系统决定的，有光源、反光镜、透光镜、光圈、聚光镜等，因此视野中的光照强弱可以通过以下几种方式调节：

调节光源调节旋钮，改变光源的强弱

反光镜的平面镜减弱光照强度，凸透镜一面增大光照强度

增大透光镜可以提高光照强度，减小透光镜可以减弱光照强度

增大光圈可以提高光照强度，缩小光圈可以减弱光照强度

下调聚光镜可以减弱光照强度，上升聚光镜可以增大光照强度

如何提高显微镜的分辨率？

答：显微镜的分辨率是显微镜最主要的性能指标之一，指显微镜能够识别标本上相邻两点之间距离的能力，主要由物镜的分辨率决定。距离越小则分辨率越大，反之则越小。两点之间的距离可以用如下公式表示：

D=0.5*λ/Na

D：显微镜能够识别标本上两点之间距离

λ：显微镜所用的光波长

Na=n*sinθ

Na：光源照射到标本上的光柱被物镜吸收的光量

n：物镜与标本之间介质的折光率

θ：光源照射到标本上的光线与光轴之间最大的夹角

由以上公式可知显微镜的分辨率主要是由λ和Na两个因素决定的，λ越大Na越小则D越大，则显微镜的分辨率越小；λ越小，Na越大，则显微镜的分辨率越大。因此可以通过以下几种方式提高显微镜的分辨率：

降低显微镜波长，使用短波光源

增大介质n，提高Na，从而提高显微镜的分辨率

增大θ，从而提高Na，从而提高显微镜的分辨率

增加标本在视野中的明暗反差

为什么要按照低倍镜、高倍镜、油镜的观察顺序使用显微镜？

答：1、低倍镜下视野范围大，很容易就可以找到目标，再转动高倍镜之后，只要稍微调节一下焦距就可以在高倍镜下清晰的观察到目标

2、当观察未知样品时，如果待测样品太大，高倍镜下很难找到目标

3、低倍镜放大倍数小，焦距大，镜头距标本之间的距离比高倍镜和油镜都近，当从低倍镜向高倍镜和油镜转换时，不会使镜头接触到标本，导致镜头或载玻片破坏

4、对于好的显微镜来说，镜头之间基本上是同焦的，镜头之间转换基本上不需要调焦，所以在低倍镜下找到目标之后将目标移至事业中央，再转动高倍镜观察很方便

四、油镜的使用方法以及注意事项

答：使用方法：

将标本放到载物台上用夹片夹固定，移动载物台下的推进器，是标本处在物镜的正下方

将低倍镜移至光路之中

在低倍镜下找到目标，并移至视野中央

降低载物台，在标本上添加一两滴香柏油

转动油镜

从侧面观察，升起载物台，使镜头浸没在精油之中，镜头与标本之间的距离尽量接近，但是不要相互接触，否则容易损坏镜头

油镜下观察，光照强度损失很大，因此需要开足光圈，使视野明亮

目镜观察，慢慢降低载物台，出现图像之后，调节焦距使视野清晰

用毕之后降低载物台，取下载玻片，用擦镜纸蘸取少量二甲苯擦拭油镜镜头

将转换器转呈八字形，降低聚光镜，右手握镜臂，左手托镜座，将显微镜放回镜室中

酵母菌形态观察

染色法鉴别酵母菌死活

用碱性美兰染色液对酵母菌进行染色，为什么要控制染色液浓度和染色时间？

答：美兰是一种碱性弱氧化剂，氧化态呈蓝色，还原态呈无色。当用美兰对酵母菌进行染色，由于活的酵母细胞代谢旺盛，细胞内还原态很高，从而使美兰被还原成无色的还原态，从而细胞呈无色；对于衰老死亡的酵母细胞，保内代谢能力弱，还原态不强，美兰不易被还原而使菌体被染成蓝色。

因此，当染色液浓度过高或染色时间太长，即使活的酵母细胞也会被染色成蓝色，从而造成观察到的死细胞数较多；当染色液浓度过低或时间很短，即使死的酵母细胞也不会被染色，从而造成观察到的活细胞数较多，导致观察结果不可信。

当染色液浓度过高，细胞会脱水死亡，从而增加了对染料的通透性，也会造成观察到的现象不可信

染色时间过长，细胞长期脱离培养环境而死亡，也会影响染色的效果

美兰具有氧化性，浓度过高会对细胞具有一定的损伤

酵母菌细胞大小的测定

答：微生物细胞大小是微生物细胞最主要的特征之一，也是微生物分类鉴定的指标之一。由于微生物细胞个体较小，因此需要借助特殊的测量工具（测微尺）进行测量，测微尺有镜台测微尺和目镜测微尺

镜台测微尺是一个特制的载玻片，用于对目镜测微尺进行标定，中间有一厘米的刻度线，被分成100等分，即每一小格10μm，不能直接用于对标本进行测量

目镜测微尺是一个中间刻有等分刻度的圆形小玻璃片，有50或100等分刻度两种，使用时直接放到木境内的隔板上，直接测量经显微镜放大后的细胞物象

由于目镜测微尺测量的是经过显微镜放大后的细胞物象，因此在不同显微镜下，不同的物镜和目镜的组合下，目镜测微尺每一格所代表的实际大小不同，因此在用目镜测微尺测量微生物细胞大小的时候需要对目镜测微尺进行标定，以确定目镜测微尺每一小格所代表的实际长度

装目镜测微尺

将接