微生物的分离纯化与观察.pptx

一试验目标

1、了解微生物分离和纯化原理

2、掌握倒平板方法和几个惯用分离纯化接种培养基本操作技术，掌握微生物无菌操作技术

3、

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二试验原理

为了生产和科学研究需要，往往需要从自然界混杂微生物群中分离单一菌种，这种取得单一菌株纯培养方法称为微生物分离。

为了取得某种微生物纯培养，可采取以下两种方法：一个是提供有利于该微生物生长繁殖最适培养基及培养条件。如要从土壤中分离自生固氮菌，则其培养基中是不能含有N源，这种培养基就比较适于能利用空气中N2微生物。另一个方法是在培养基中加入某种化学物质，以抑制人们所不需要微生物生长繁殖。分离土壤中真菌，往往在分离真菌PDA培养基中加入适当孟加拉红，链霉素和金霉素等化学药品，目标在于抑制细菌生长，这么更有利于取得其纯培养。

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平板分离方法主要有：

1、平板划线分离法；

2、稀释涂布平板法。

除能有效分离纯化微生物外，还可用于测定样品中活菌数量。

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土壤中微生物数量众多，在肥沃土壤中固氮菌数量也很多，自然界中多数氮素养料是由微生物固氮结果，固氮菌普通可分为自生固氮菌和共生固氮菌两类。

要分离自生固氮菌，惯用阿斯毕无氮培养基这种选择培养基，控制其适宜环境条件，使它在培养基上大量繁殖，然后经过稀释法和划线分离纯化法，使它在培养基上形成单菌落，如分离所得不纯，需要深入纯化，直到得到纯种.

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三试验材料

1、培养基：阿斯毕无氮培养基。

2、菜园土。

3、灭菌培养皿、镊子、剪刀、接种针、酒精灯等。

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四方法与步骤

（一）富集培养：

1、用已灭菌后冷却至50oC左右阿斯毕培养基倒成平板。

2、用已灭菌镊子将黄豆粒大菜园土摆入已冷凝平板培养基上。

3、正面放置培养箱中培养，28oC培养3~4天后，在土粒周围有混浊半透明胶状菌落出现，有在后期会产生褐色色素。

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（二）划线分离纯化:(下次试验)

1、用已溶化至50oC阿斯毕培养基倒入平板。

2、用接种环挑取上述菌落少许，在冷凝平板上进行划线分离，而后置28oC培养4天。

划线方法如图：

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（三）纯化、镜检，得到纯种培养（下次试验）

1、平板上出现单菌落，按无菌操作移入阿斯毕培养基斜面试管中，28oC培养4天。

2、镜检：将斜面菌株进行涂片、染色、镜检。如是粗短杆状或球状单一形态菌体细胞较大，常呈单个或“8”字排列，在细胞表面有较厚荚膜者，即为自生固氮菌。如有杂菌，需要深入划线纯化。

3、将得到纯化菌株，移接到另一阿斯毕培养基斜面管，28oC培养3~4天，即取得纯培养菌，可冷冻保留，备用。

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五注意事项

在微生物分离、纯化每一操作步骤，要严格按照无菌操作进行。

平板划线时，划线部位不可重合。

划线时，每次都要将接种环上多出菌体烧掉。

培养皿要贴标签，包含班级、姓名

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