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“探究抗生素对细菌的选择作用”的实践研究

摘要

为了增强学生科学探究和科学思维的能力，提升生物实验教学的情境性、应用性，本文结合2019年人教版高中生物学教材必修2“探究抗生素对细菌的选择作用”细菌作用形成的抑菌圈大小，定量观察和比较分析不同种类抗生素对大肠杆菌的选择作用，引导学生理解自然选择在生物进化中所发挥的作用。实验教学时，可根据学情有针对性地开展不同种类、不同浓度、不同处理方式下抗生素对细菌的选择作用；除了选择大肠杆菌作为研究对象，还可尝试金黄色葡萄球菌、酵母菌等其他菌种，以丰富实验成果。另外，引导学生关注细菌耐药性对人类健康产生的影响，辩证地看待抗生素的研发和使用与细菌耐药性之间的关系，逐渐地建立起一定的社会责任和社会担当意识。

关键词

抗生素选择作用大肠杆菌高中生物

人教版高中生物教材（2007年版）必修2《遗传与进化》第七章中，设置了自然选择对种群基因频率变化影响的探究实验，这是桦尺蠖的自然种群，因环境污染而发生基因频率定向改变的现象，能较好地帮助学生理解自然选择在生物进化中的作用。在2019新版教材当中，保留了上述探究实验，并新增探究抗生素对细菌的选择作用，要求学生以生活中常见的抗生素为材料设计抑菌实验，突出“自然选择在生物进化中的定向作用”，强化对进化实质的理解。为了充分运用学生所学，并探讨该实验在实验教学当中，将会遇到哪些实际问题，我们开展了如下的实践研究。

1实验材料与用具

1.1实验菌种大肠杆菌、金黄色葡萄球菌，均从网络平台购买。

1.2仪器设备电子天平、称量纸、pH试纸、镊子、药勺、记号笔、报纸、牛皮纸、棉线、250mL锥形瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、定性滤纸、打孔器、接种环、玻璃涂布器、培养皿、试管、微量移液器（50uL、200uL）、移液器枪头、酒精灯、高压蒸汽灭菌锅、微波炉、恒温培养箱、超净工作台等。

1.3实验试剂抗生素（头孢拉定、罗红霉素、阿莫西林，从普通药房购买）、LB琼脂培养基（蛋白胨10g、酵母膏5g、NaCl10g、琼脂20g，用0.2mL的质量分数为5mol/L的NaOH溶解后，用蒸馏水定容至1000mL，调节pH为7）、无菌水

2实验准备

2.1配置抗生素溶液根据药剂使用说明，配置8mg/mL、6mg/mL、4mg/mL、mg/mL、1mg/mL的阿莫西林溶液，配置1mg/mL的头孢拉定溶液和罗红霉素溶液。【3】

2.2配置LB琼脂培养基称取蛋白胨10g、酵母膏5g、NaCl10g、琼脂20g，用0.2mL的质量分数为5mol/L的NaOH溶解后，用蒸馏水定容至1000mL，调节pH为7，分装至50mL锥形瓶中，包扎后放入高压蒸汽灭菌内进行灭菌。

2.3其他需灭菌的仪器培养皿、接种环、玻璃涂布器、试管、移液器枪头、用打孔器打出直径为6mm的滤纸片分别包扎好，均用高压蒸汽灭菌，121℃灭菌20min；将实验所需要用到的记号笔、移液器等仪器放入超净工作台中，打开紫外灯灭菌30min，灭菌后关闭紫外灯，打开风机和照明灯。

3实验设计与实施

3.1成立兴趣小组根据所带班级学生兴趣和实验室的设备条件情况，成立15-20人的研兴趣小组并分成2-3个（每组6人）研究小组。

3.2明确研究方案为了保证实验的严谨性、科学性，由研究小组自主设计并讨论方案后，在教师的指导下各小组共同商讨形成一个最佳方案，然后分组完成实验。

3.3倒平板将灭菌后的培养基与培养皿放入超净工作台中，紫外灭菌30min后，关闭紫外灯，待将灭菌后的培养基冷却至45℃左右时，完成倒平板。

3.4制备菌悬液接种前将所有工具用紫外灯灭菌30min，用接种环直接挑取少量菌种，放入试管的无菌水中，制备成细菌悬液。

3.5抑菌实验用移液器吸取200μL细菌悬液于平板上，用涂布器涂抹均匀。用无菌镊子将滤纸片浸入配制好的抗生素溶液中，取出并在容器内壁上滤去多余的药液，将滤纸片贴在平板上(每个平板放3片滤纸片)，将贴好滤纸片的平板倒置，于37℃培养24h后，观测抑菌效果，取出测定抑菌圈的直径，记录并比较结果。

4实验结果与分析

4.1不同种类抗生素对大肠杆菌的选择作用

中同一培养皿上，1号为空白对照组，2、3、4号为平行实验组，含一定浓度的抗生素滤纸片，其周围未形成菌落的区域称为抑菌圈，抑菌圈的大小反应了大肠杆菌对该种抗生素的耐药性的程度。

不同的抗生素对对大肠杆菌均有一定的选择作用，随着传代次数的增加，大肠杆菌种群中具有耐药性的个体在增加，大肠杆菌的耐药性在逐渐提高。

4.2不同浓度的阿莫西林溶液对大肠杆菌的选择作用

根据抗生素药剂服用说明，设置了阿莫西林溶液浓度梯度。经过多次传代培养，结果如下。同学们同样完成了数据统计，从数据来看，不同浓度的阿莫西林对大肠杆菌的选择作用差异不显著。

不过，研究小组同学对这个结果心生质疑，他们认为，滤纸片较小，携