SNT 4418-2016 出口食品中骆驼源性成分的检测 实时荧光PCR法.docxVIP

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T4418—2016

出口食品中骆驼源性成分的检测实时荧光PCR法

DetectionofCamelusingredientinexportfood—Real-timePCRmethod

2016-03-09发布2016-10-01实施

中华人民共和国

国家质量监督检验检疫总局

发布

I

SN/T4418—2016

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。

本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院。

本标准主要起草人：吴亚君、陈颖、杨艳歌、王斌、王娉、刘鸣畅、韩建勋、黄文胜、邓婷婷。

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SN/T4418—2016

出口食品中骆驼源性成分的检测实时荧光PCR法

1范围

本标准规定了食品中骆驼源性成分的实时荧光PCR检测方法，可以对食品中骆驼源性成分进行定

性检测，在检测范围和技术指标方面可满足食品的检测需求

本标准适用于乳品，新鲜、冷冻和加工的肉品中骆驼源性成分的定性检测。本标准所规定方法的最低检出限(LOD)为0.01%(质量分数):

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T27403—2008实验室质量控制规范食品分子生物学检测

3术语和定义、缩略语

3.1术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1.1

骆驼camelus

偶蹄目骆驼科骆驼属，包括单峰骆驼和双峰骆驼

3.1.2

实时荧光PCRrealtimePCR

在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的积累立时监控整个PCR扩增过程，实现对起始

模板的定量及定性分析。3.1.3

Ct值cyclethreshold

每个反应管内的荧光信号达到设定阈值时所经历的循环数。

3.2缩略语

下列缩略语适用于本文件。

DNA:脱氧核糖核酸(deoxyribonuleicacid)

dNTP:脱氧核苷酸三磷酸(deoxyribonuleosidetriphosphate)

CTAB:十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrithylammoniumbromide)

Tris:三羟甲基氨基甲烷[Tris(Hydroxymethyl)aminomethane]EDTA:乙二胺四乙酸(Ethylenediaminetetraaceticacid)

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SN/T4418—2016

Taq:水生栖热菌(Thermnsaquaticus)

OD:光度密度(opticaldensity)

Cytb:线粒体细胞色素b基因(cytochromeb)

GH:生长激素基因(growthhormonegene)

4方法提要

提取DNA,采用骆驼的特异性检测引物和探针进行实时荧光PCR扩增，观察实时荧光PCR信号，对食品中骆驼成分进行定性检测。

5试剂和材料

除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂。实验用水符合GB/T6682的要求。所有试剂均用无DNA酶污染的容器分装。

5.1检测用引物和探针：骆驼源性成分扩增引物和探针、内参照引物和探针详见表1。骆驼引物扩增的靶标序列参见附录A。

表1骆驼Cytb基因序列引物探针

物种名称

引物/探针序列(5′→3)

扩增片段长度

靶基因

哺乳动物(内参照)

F:CCTCAGCAGGGTCTTCACCA

66bp

GH

R:TTCAGCTTCTCGTAGACNCG

P:FAM-CAGCCTGGTGTTTGGCACCTCGGA-TAMAR

骆驼

F:ATTCTTYGCCTTCCAYTTCA

307bp

Cytb

R:AGCGTATGCGAAYAGGAART

P:(FAM)-CCTACACGAAACAGGYTCTAATAACCCGAC-(TAMRA)

5.2三氯甲烷(氯仿)。

5.3异丙醇。

5.4CTAB提取液：20g/LCTAB,1.4mol/LNaCl,0.1mol/LTris-HCl,0.02mol/LNa?EDTA,