《辣椒素合成酶活力的测定》编制说明.docx

《辣椒素合成酶活力的测定》

编制说明

一、工作简况

（一）任务来源

辣椒素是辣椒中特有的一种生物碱类植物次生代谢产物，在食品、保健、医药、农业和军事等领域都具有重要应用前景。辣椒素合成酶（capsaicinsynthase，CS）催化辣椒素合成过程最后一步反应，即8-甲基-6-壬烯基CoA与香兰素胺合成辣椒素，被认为是辣椒素合成调控的关键酶。研究辣椒素合成酶活力与辣椒素含量的关系，可为丰富不同辣椒类型的辣椒素合成酶的基因资源和通过基因工程方法调控辣椒素含量打下基础。

对于辣椒素合成酶活力的测定，由于缺乏统一的标准，使得在进行生化实验中难以确保实验数据的重复性、科学性和准确性。因此建立辣椒素合成酶活力检测方法标准十分重要。研制辣椒素合成酶活力的测定标准将为辣椒素合成酶的生产、流通及监管提供依据，促进我国辣椒素合成酶相关的食品、保健、医药等工业的健康发展，具有非常重要的现实意义。根据行业的现实需求，中国标准化研究院于2024年3月提出《辣椒素合成酶活力的测定》团体标准计划，并牵头承担标准起草任务。

2024年5月，经中国产学研合作促进会组织专家通过批准立项，立项名称为《辣椒素合成酶活力的测定》。

（二）标准的起草单位及起草人

本标准起草单位：

本标准主要起草人：

（三）主要工作过程

1.预阶段

2024年3月至2024年5月标准起草单位组织相关技术人员对《辣椒素合成酶活力的测定》标准项目进行了预研，对辣椒素合成酶的活力测定条件进行了摸索，初步确立了辣椒素合成酶活力的测定方法。标准起草组向中国产学研合作促进会提交了标准建议书与标准草案，进行申报立项。

2.立项阶段

2024年5月，中国产学研合作促进会正式通过本团体标准的立项。

3.起草阶段

针对该标准项目，正式成立了标准起草工作小组，明确了任务要求，安排了工作进度，根据单位参与的人员的专业、技能、人数将任务合理分配。依据GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》对标准草案进一步完善的同时，开展技术指标的实验验证工作。

在此期间，通过线上和线下会议结合的形式开展了3次工作会议。会议就标准制定的相关问题进行了协商与研究，并对标准的框架及内容进行了认真研究和讨论。由此形成了最终的《辣椒素合成酶活力的测定》团体标准征求意见稿和编制说明。

二、确定标准主要技术内容

（一）标准编制原则

坚持严要求、适宜性与可操作性相结合的原则。严要求即标准的编制严格遵循GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》及相关法规的要求进行；适宜性既要充分考虑到本行业的发展现状与特点，又要有一个适宜的范围与程度,从而提高标准贯彻实施的可操作性。

（二）本标准主要技术内容

1.主体内容

本标准的主体内容包括：范围、规范性引用文件、术语和定义、原理、试剂、仪器设备、试样制备和试验步骤、试验数据处理以及精密度。

2.范围

本文件描述了测定辣椒素合成酶活力的方法。本文件适用于生化试剂及科研试验中辣椒素合成酶活力的测定。

3.规范性引用文件

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。

GB/T21266辣椒及辣椒制品中辣椒素类物质测定及辣度表示方法

4.术语和定义

对辣椒素合成酶活力单位进行了定义，是在37℃、pH6.8的条件下，每小时生成1μmol辣椒素所需的酶量为一个酶活力单位，其单位

为U。

5.原理

辣椒素合成酶催化香兰素胺和8-甲基-6-壬烯酰CoA反应生成辣椒素，通过高效液相色谱测定辣椒素的生成量，来计算酶活力。

6.试剂

本标准给出了辣椒素合成酶的测定方法中所使用的试剂的清单，包括香兰素胺、乙酰CoA、ATP、8-甲基-6-壬烯酸、磷酸钾缓冲液、盐酸溶液、氯仿、甲醇、辣椒素标准品，以及辣椒素合成酶的反应底物溶液。描述了试剂的主要特性，并给出了溶液的制备方法。

由于酶活会受到反应底物浓度、pH以及温度的影响，在测定不同反应底物浓度，不同pH以及不同温度的辣椒素合成酶活力的基础上，合理确定了辣椒素合成酶活力测定的底物溶液的相关参数。辣椒素合成酶的反应底物溶液含0.5M磷酸钾缓冲液，pH6.8，1μMMgCl2，1μMATP，5μM香兰素胺，5μM8-甲基-6-壬烯酸和5μM乙酰CoA。

7.仪器设备

本标准给出了辣椒素合成酶活力的测定方法中所使用的仪器设备的清单，并描述了主要特性。仪器设备包括分析天平、pH计、恒温水浴锅、高效液相色谱仪以及移液器。

8.试样制备和试验步骤

使用移液器移取适量辣椒素合成酶液体样品溶于水中进行稀释，