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微生物的生理生化反应

姓名：张弛学号：201100140157班级：生院2011级生物基地

生北周一第六组同组者：关事成、钱丹丹、喻心仪、刘婷婷、钟天白

一、实验目的

1、证明不同微生物对各种有机大分子物质的水解能力不同，从而说明不同微生

物有着不通过的酶系统。

2、掌握进行微生物大分子物质水解试验的原理和方法。

3、了解糖发酵的原理，掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。

4、了解吲哚和甲基红试验的原理以及其在肠道细菌鉴定中的意义和方法。

二、实验原理

微生物的生理生化反应原理：在所有生活细胞中存在的全部生物化学反应称

之为代谢。代谢过程主要是酶促反应过程。许多细菌产生胞外酶，这些酶从细胞

中释放出来，以催化细胞外的化学反应。各种细菌由于具有不同的酶系统，致使

它们能利用不同的底物，或虽然可以利用相同的底物，却产生不同的代谢产物，

因此可以利用各种生理生化反应来鉴别细菌。

大分子水解：微生物对大分子的淀粉、油脂不能直接利用，必须靠产生的胞

外酶将大分子物质分解后才能被微生物吸收利用。

微生物的胞外酶（如淀粉酶、脂肪酶等）主要为水解酶，将大分子物质分解

的过程可以通过观察细菌菌落周围的物质变化来证实。

淀粉遇碘液会产生蓝色，但细菌水解淀粉的区域，用碘测定不再产生蓝色，

表明细菌产生淀粉酶。

脂肪水解后产生脂肪酸可改变培养基的PH，使PH降低，加入培养基的中

性红指示剂会使培养基从淡红色转变为深红色，说明细胞外存在脂肪酶。

糖发酵试验：是常用的鉴别微生物的生化反应。某些细菌能利用糖类作为碳

源和能源，使糖类分解为产酸产气或产酸不产气。不同种的细菌对于各种糖类利

用能力不同，分解产物也不同。

大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气；普通变形杆菌只能分解葡萄糖产

酸产气，不能分解乳糖。

发酵培养基含有蛋白胨、指示剂（溴甲酚紫）、倒置的德汉氏小管和不同的

糖类。当发酵产酸时，溴甲酚紫指示剂可由紫色（PH6.8）转变为黄色（PH5.2）。

气体的产生可由倒置的德汉氏小管中有无气泡来证明。

吲哚实验：用来检测吲哚的产生，有些细菌产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的

色氨酸，产生吲哚和丙酮酸。吲哚与对二甲基氨基甲醛结合，形成红色的玫瑰吲

哚。但并非所有的微生物都具有分解色氨酸产生吲哚的能力，因此吲哚试验可以

作为一个生物化学检测的指标。

甲基红实验：用来检测由葡萄糖产生的有机酸，如甲酸、乙酸、乳酸等。当

细菌代谢糖产生酸时，培养基就会变酸，使加入培养基中的甲基红指示剂由橙黄

色（PH6.3）转变为红色（PH4.2），即甲基红反应。大肠杆菌和产气肠杆菌在培

养的早期均产生有机酸，但大肠杆菌在培养的后期仍能维持酸性PH4，而产气肠

杆菌则转化有机酸为非酸性末端产物，如乙醇、丙酮酸等，使PH升至大约6。

因此，大肠杆菌为阳性，产气肠杆菌为阴性。

三、实验器材

1、菌种：枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌（大分子水解试验）

大肠杆菌、普通变形杆菌（糖发酵试验）

大肠杆菌、产气肠杆菌（吲哚试验）

大肠杆菌、产气肠杆菌（甲基红试验）

2、培养基：（1）固体淀粉培养基，固体油脂培养基（大分子水解试验）

（2）葡萄糖发酵培养基、乳糖发酵培养基试管各3支（内装有倒置的德汉氏小

管）（糖发酵试验）

（3）蛋白胨水培养基（吲哚试验）

（4）葡萄糖蛋白胨水培养基

3、溶液和试剂：卢戈氏碘液，乙醚，吲哚试剂，甲基红试剂，蒸馏水，中性红

试剂等

4、仪器或其他用具：培养皿，试管，酒精灯，烧杯，德汉氏小管，接种环等

四、实验步骤

A．大分子水解试验

1．粉水解试验

（1）配制固体淀粉培养基，灭菌，待培养基冷却至50℃左右，无菌操作制

成平板。

（2）用记号笔在平板底部划成四部分

（3）将枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、和铜绿假单胞菌分别在不同的部分点种，

在平板的反面对应部分分别写上菌名

（4）将平板倒置，在37℃温箱中培养24小时

（5）观察各种细菌的生长情况，打开平板盖子，滴入少量卢戈氏碘液于平

板中，轻轻旋转平板，使碘液均匀铺满整个平板

如菌苔周围出现无色透明圈，说明淀粉已被水解，为阳性。透明圈的大小可

初步判断该菌水解淀粉能力的强弱，即产生胞外