water高效液相色谱仪的使用说明.pdfVIP

转载：《分析测试百科网》Waters600型高效液相色谱仪操作规程

一．开机前打算

1．依据须要选择合适色谱柱。

2．在容器中放入已过滤脱气好的流淌相，把吸滤过滤头放入容器中。

二．开机

1．打开所需仪器的电源开关，打开氦气阀门。

2．等各仪器自检通过后，开微机进入WindowsNT，双击millog.exe，进入

millennium32工作站。

三．编辑仪器方法

1．选择所需Project，runsample上击右键，选择所需仪器，联机。

2．点击instrumentmethod的edit，设置好各仪器参数。

3．保存所编缉的方法。

四．样品分析与采集

1．点击setup，建立方法。

2．等待色谱柱、系统平衡，基线稳定后，设置好样品信息，点击Start，即起

先样分析与数据采集。

五．报告输出

1．在millennium32界面点击BrownProject。

2．选择所需Project，选择所要处理的数据文件。

3．选择所要选用的报告格式，输出报告。

六．关机

1．冲洗色谱柱，排出流路中可能有的缓冲液，并用双蒸水冲洗泵的柱塞杆。

2．泵停止，关闭氦气阀门。

3．退出工作站，关闭仪器电源。

4.在记录本上记录运用状况。

留意事项：

1.全部的溶剂均选用HPLC级试剂。

2.水相流淌相需常常更换，防止长菌变质；假如流淌相有缓冲盐，必需用5%甲

醇或5%乙腈过渡冲洗。

3.样品均用0.45um的滤膜过滤后才可进样。

4.色谱柱用合适的溶剂保存，若为C18柱举荐用甲醇保存。

一、问：用HPLC液相色谱仪进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速

改变，缘由何在?如何解决?

答：关于漂移问题：

1、温度限制不好，解决方法是采纳恒温装置，保持柱温恒定

2、流淌相发生改变，解决方法是防止流淌相发生蒸发、反应等

3、柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡

关于快速改变问题

1、流速发生改变，解决方法是重新设定流速，使之保持稳定

2、泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。

3、液相色谱仪流淌相不合适，解决方法为改换流淌相或使流淌相在限制室

内进行适当混合

二、问：色质联用中毛细柱的选择应留意什么问题?

答：1、柱效要高

2、热稳定性好

3、化学惰性强

详细选择应留意

1、柱极性。依据分析样品选择不同极性的柱子进行分析

2、柱子内径。内径大小确定柱容量

3、液膜厚度。分析样品温度一不一样，对膜厚有不同要求，温度高液膜要

厚，温度低液膜要薄

4、柱长度。柱越长，柱效越高，分别效果越好，但也存在吸附问题，柱子

过长，分析时间长，因此要依据样品考虑柱子长

度

5、外涂层(柱体)的选择

6、另外还有仪器型号、分析对象等因素

三、问：液相色谱仪中峰出现拖尾或出现双峰的缘由是什么?

答：1、筛板堵塞或柱失效，解决方法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱

子。

2、存在干扰峰，解决方法为运用较长的柱子，改换流淌相或更换选择性好

的柱子

四、问：从那些方面可以简洁判别毛细管柱子的热稳定性好坏?

答：1、安排容量(或容量因子)K，好的柱子在高温运行后，安排容量K不应

有明显的下降，否则，说明柱子的热稳定性不好。

2、理论塔板数n，热稳定性好的柱子经受高温后，理论塔板数应基本保持

恒定

3、柱子的极性。热稳定性好的柱子，高温前后极性改变不大，详细表现为

保留指数I值没有大的改变。

4、噪声。热稳定性好的柱子在高温下运用后，噪声不能增加.

5、柱子的去活层，毛细管柱子涂固定液前内部一般要用去活性试剂去活以

增加惰性。质量好的毛细管柱子高温后，去活层

不应当改变，表现在对强极性样品或酸碱性样品的吸附性不能增加。