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霍乱弧菌分子生物学检测技术的应用

【摘要】现今，随着分子生物学的快速发展，许多先进的分子

生物学技术都被应用于对霍乱弧菌的研究，不仅为霍乱弧菌的检测

以及快速分型提供了十分重要的依据，还从分子水平上阐明了霍乱

疫情的形成，流行性质，菌株类型，以及霍乱弧菌的变异和遗传情

况。

【关键词】分子生物学；相关检查技术；霍乱弧菌

霍乱是由霍乱弧菌感染引发的一种流行广泛的甲类传染病[1]。

霍乱弧菌是肠道传染病霍乱的病原体[2]。人类是霍乱弧菌的唯一

易感者[3]。被感染者，往往表现为腹泻、剧烈呕吐、脱水、甚至

死亡。从1817年至今，人类累计经历了7次大规模流行的霍乱。

霍乱，它具有起病急骤、传播迅速、波及广泛、病死率高等特点，

霍乱弧菌广泛的分布自然界中，可以通过污染水源及食物而引发疾

病。对于霍乱的预防及治疗的关键在于，及时监测疫区外环境标本。

对霍乱弧菌做出迅速、准确的检测是霍乱防治的重要方法。传统的

分离培养方法费时费力，不能适应疾病的快速发展，将分子生物学

的相关检测技术应用于对霍乱弧菌的检测，可精准、快速的进行检

测，为疫情的处理，临床诊断提供了及时可靠的依据，同时也可有

效追踪传染源，确定霍乱菌株类型，预测霍乱的流行趋势。本文将

对几种用于霍乱弧菌分子生物学检测技术，作简单的介绍。

1pcr

pcr技术主要包括：普通pcr、荧光pcr、套式pcr、多重pcr等。

1.1普通pcr普通pcr是通过检测出霍乱弧菌0139和01菌群的

ctxa、ctxb基因，继而检测属于霍乱弧菌并检测出其毒力基因的常

规方法。shirai[4]依据lt和ct的高度同源性，建立了基于ctx

基因的特异的pcr检测方法，它检测细菌染色体的灵敏度很高，能

检出仅含三个活菌的样本。

1.2荧光pcr荧光定量pcr，它是通过荧光或者荧光燃料标记的

特异探针，对pcr的产物进行跟踪标记。它具有无需电泳、快速定

量、无交叉污染等诸多优点，被广泛的应用于临床。应用荧光pcr

可快速有效的检测出霍乱弧菌0139群、01群、非0139群、非01

群毒素的相关基因。

1.3套式pcr套式pcr，也可称为巢式pcr，即使用两对prc引

物来扩增完整的片段。套式pcr中，第一对引物扩增片段的方式与

普通pcr极为相似，第二对引物也叫做巢式引物，他们往往结合在

第一次pcr产物的内部，这就导致第二次pcr扩增的片段会短于第

一次。巢式pcr，它具有非常高的特异性。susanna等依据0139群

o抗原合成相关基因片段建立的套式pcr可用于0139群霍乱弧菌的

特异检测[5]。

1.4多重pcr多重pcr，也可称为复合pcr或者多重引物pcr，

它是在同一个pcr反应体系中加入两对及以上的引物，在同一时段，

扩增出许多的核酸片段，它具有高效性、系统性、经济便捷性等诸

多优点。

2aflp

aflp（扩增片段长度多态性）是一项新型的分子标记技术，是由

荷兰的pietervos等在1993年发展起来的一种多态性dna检测新

方法，它具分析需要dna含量少，可重复性好，多态性强，分辨率

高，无放射线损害，适用性广，稳定性好等诸多优点。aflp技术的

原理：对基因组酶切后的片段，进行选择性扩增，已获取的扩增片

段经电泳检测，继而检测出获得的不同长度的扩增片段。jiang[6]

采用aflp技术分析不同环境，不同地点的临床分离的霍乱弧菌多

态性，结果显示分离的临床0139菌株及01菌株在遗传学关系上要

比环境中的0139菌株及01菌株更为紧密。aflp分析与pfge、rflp、

rapd、rep-