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学必求其心得，业必贵于专精
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eq\a\vs4\al（考点二微生物的应用)
基础点
1微生物的实验室培养
(1）培养基
①概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质.
②成分eq\b\lc\{\rc\（\a\vs4\al\co1（一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，还要满足不同微生物生长对pH、特殊营养物质，以及氧气的需求)）
③分类eq\b\lc\{\rc\(\a\vs4\al\co1（固体培养基：含凝固剂,液体培养基：不含凝固剂))
(2)无菌技术
①含义：指在培养微生物的操作中,所有防止杂菌污染的方法.
②关键：防止外来杂菌的入侵。
注意点消毒和灭菌的辨析
项目
条件
结果
常用方法
应用范围
消毒
较为温和的物理或化学方法
仅杀死物体表面或内部的部分对人体有害的微生物
煮沸消毒法
日常用品
巴氏消毒法
不耐高温的液体
化学药剂消毒法
用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源
灭菌
强烈的理化因素
杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子
灼烧灭菌法
接种工具
干热灭菌法
玻璃器皿、金属工具
高压蒸汽灭菌法
培养基及容器的灭菌
(3）纯化大肠杆菌以及菌种的保藏
①制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板。
②纯化大肠杆菌
a．原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。
b．方法：平板划线法、稀释涂布平板法。
③菌种的保藏
a．短期保存:固体斜面培养基上4℃保存，菌种易被污染或产生变异。
b．长期保存：甘油瓶中－20℃在冷冻箱中保藏.
2土壤中分解尿素的细菌的分离和计数
(1)菌种筛选：使用尿素是唯一氮源的选择培养基培养。
（2)统计菌落数目：常用方法有稀释涂布平板法、显微镜直接计数法.
(3）细菌分离与计数的实验流程：土壤取样→配制培养基→微生物的培养与观察→细菌的计数.
3分解纤维素的微生物的分离
(1)纤维素酶
①组成：纤维素酶是一种复合酶,它包括C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶.
②作用
(2）菌种筛选
①方法：刚果红染色法。
②原理
eq\b\lc\\rc\｝(\a\vs4\al\co1(刚果红,纤维素))→红色复合物红色消失、出现透明圈
即：使用以纤维素为唯一碳源的选择培养基，根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。
(3)筛选流程
土壤取样：富含纤维素的环境
↓
选择培养：用选择培养基培养，以增加纤维素分解菌的数量
↓
梯度稀释
↓
涂布平板：将样品涂布于含CR的鉴别纤维素分解菌的培养基上
↓
挑选产生透明圈的菌落：产生纤维素酶的菌落周围出现透明圈
重难点
1选择培养基和鉴别培养基的应用实例
类型
实例
选择
培养基
培养基中加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌
培养基中加入高浓度的食盐用于分离得到金黄色葡萄球菌
以尿素作为唯一氮源的培养基用于分离分解尿素的细菌
不添加氮源的培养基用于分离固氮微生物
石油是唯一碳源时，可以抑制不能利用石油的微生物的生长，使能够利用石油的微生物生存，达到分离能消除石油污染的微生物的目的
培养基放在高温环境中培养只能得到耐高温的微生物
鉴别培养基
伊红—美蓝培养基可以鉴别大肠杆菌（菌落呈深紫色并带金属光泽)
2微生物的筛选与计数
（1）筛选菌株
①原则：人为提供有利于目的菌株生长的条件，同时抑制或阻止其他微生物的生长。
②菌株筛选原理的比较
土壤中分解尿素的细菌
分解纤维素的微生物
a.选择培养基的成分：尿素作为唯一的氮源
b.鉴定方法:在培养基中加入酚红指示剂，若pH升高，指示剂变红，说明细菌能分解尿素
a。选择培养基的成分:纤维素作为唯一的碳源
b。鉴定方法:刚果红染色法，即刚果红与纤维素形成红色复合物，当纤维素被分解后,培养基出现以纤维素分解菌为中心的透明圈
(2)统计菌落数目的方法
①显微镜直接计数法
a．原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。
b．方法：用计数板计数。
c．缺点：不能区分死菌与活菌。
②间接计数法(活菌计数法)
a．原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
b．计算公式：每克样品中的菌株数＝(C÷V)×M,其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数,V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL），M代表稀释倍数。
c．操作：设置重复组，增强实验的说服力与准确性。同时为了保证结果准确，一般选择菌落数在30~300的平板进行计数。
易错警示稀释涂布平板法计数微生物的注意问题
用稀释涂布平板法计数微生物时,要求选择菌落
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