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五、DNA片段的扩增及电泳鉴定;1.实验原理;(2)电泳鉴定PCR产物的原理;②鉴定方法:PCR的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定。;②鉴定方法:PCR的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定。;琼脂糖凝胶电泳;核酸染色剂;推动杆;10倍浓缩的扩增缓冲液(含Mg2+);3.方法步骤;程序;DNA片段的扩增及电泳鉴定;(2)DNA片段的电泳鉴定;琼脂糖凝胶电泳;①为避免外源DNA等因素的污染,PCR实验中使用的微量离心管、枪头和蒸馏水等在使用前必须进行高压灭菌处理。
②该实验所需材料可以直接从公司购买,缓冲液和酶应分装成小份,并在-20℃储存。使用前,将所需试剂从冰箱拿出,放在冰块上缓慢融化。
③在向微量离心管中添加反应组分时,每吸取一种试剂后,移液器上的枪头都必须更换。
⑤在进行操作时,一定要戴好一次性手套。
⑥PCR扩增不能随意加大试剂用量。复性时不一定均为引物与DNA模板结合,也存在DNA解开的两条单链的结合,因此一般在PCR实验中引物的投入量远大于产物量(但不能随意加大浓度);;4.结果分析与评价;4.结果分析与评价;DNA片段的扩增及电泳鉴定步骤总览:
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