高考生物一轮复习复习第十单元第48课基因工程的基本工具和操作程序课件.ppt

④PCR技术与体内DNA复制的比较⑤PCR中引物设计应注意的问题a．设计引物的依据：目的基因两端的核苷酸序列。b．引物设计时既要考虑目的基因序列，又要考虑载体序列，原因：为了便于扩增的DNA片段与表达载体连接，需在引物的5′-端加上限制酶的酶切位点。c．使用的一对引物的序列不相同，因为目的基因两端具有不同的核苷酸序列。d．引物设计的要求(或引物失效的原因)：每种引物内部不能发生局部碱基互补配对；两种引物之间不能在局部发生碱基互补配对。e．每种引物内部不能发生局部碱基互补配对的原因：防止引物自身折叠。f．两种引物之间不能在局部发生碱基互补配对的原因：防止引物之间配对，导致引物不能同模板链结合。g．两种引物都结合在DNA模板链的3′-端；脱氧核苷酸连接在引物的3′-端进行延伸。2．基因表达载体的构建——基因工程的核心(1)目的：使目的基因___________________________________________，同时，使目的基因能够表达和发挥作用。(2)基因表达载体的组成及作用RNA聚合酶转录在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代3．将目的基因导入受体细胞(1)转化的含义：目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。(2)转化的方法类型常用方法常用受体细胞转化过程植物农杆菌转化法、花粉管通道法体细胞将目的基因插入Ti质粒的_________中→转入农杆菌→侵染植物细胞→整合到受体细胞的染色体DNA上→表达动物显微注射法________将含有目的基因的表达载体提纯→取卵(受精卵)→显微注射→受精卵发育→胚胎移植→获得具有新性状的动物微生物Ca2+转化法原核细胞Ca2+处理细胞→感受态细胞(细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态)→重组表达载体(DNA分子)与感受态细胞混合→感受态细胞吸收DNA分子T-DNA受精卵(3)筛选出含有目的基因的受体细胞①原理：将目的基因插入含有两种抗生素抗性基因的载体时，如果插入某种抗生素抗性基因内部，则会导致该抗生素抗性基因失活。如上图，目的基因插入了四环素抗性基因内部，则四环素抗性基因失活。②被转化的细菌有三种：含环状目的基因的细菌、含重组质粒的细菌、含质粒的细菌。③筛选方法：将细菌先放在含氨苄青霉素的培养基上培养，能生长的是含重组质粒的细菌和含质粒的细菌，如上图1、2、3、4、5菌落。再利用灭菌的绒布影印到含有四环素的培养基上，如上图能生长的菌落为2、3、4，则在含四环素培养基上不生长的即为含有目的基因的菌落，如上图1、5菌落。最后，可在含氨苄青霉素的培养基上挑取1、5菌落进行培养。4．目的基因的检测与鉴定(1)分子水平检测(2)个体水平鉴定例如：通过采摘抗虫棉的叶片饲喂棉铃虫来确定Bt基因是否赋予了棉花抗虫特性以及抗性的程度。检测方法检测目的判断标准_________和电泳鉴定目的基因是否插入转基因生物的染色体DNA上是否出现相应的电泳条带或是否出现杂交带目的基因是否转录出了mRNA________________技术目的基因是否翻译出蛋白质是否出现杂交带PCR扩增抗原—抗体杂交5．DNA片段的扩增及电泳鉴定(1)实验原理①PCR原理：利用了_____________原理，通过调节温度来控制DNA双链的解聚与结合。②电泳：DNA分子具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团可以带上正电荷或负电荷。在电场的作用下，这些带电分子会向着与它所带电荷______的电极移动，这个过程就是电泳。③PCR的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定。在凝胶中DNA分子的迁移速率与凝胶的浓度、DNA分子的____________等有关。DNA的热变性相反大小和构象(2)实验步骤离心管(3)DNA的电泳鉴定(4)成功扩增出DNA片段的判断依据是可以在紫外灯下直接观察到DNA条带。微量移液器紫外灯1．基因表达载体中含有启动子和密码子。()2．检测目的基因是否成功表达可用抗原—抗体杂交技术。()3．将重组表达载体导入动物受精卵常用基因枪法。()4．用PCR方法扩增目的基因时需要设计两种引物。()5．用PCR方法扩增目的基因时不必知道基因的全部序列。()6．抗虫基因即使成功地插入植物细胞染色体DNA上也未必能正常表达。()7．从大肠杆菌细胞中获得了人胰岛素基因的mRNA，说明目的基因完成了表达。()×√×√√√×*第48课基因工程的基本工具和操作程序第十单元生物技术与工程·学业质量水平要求·1.概述基因工程是在遗传学、微生物学、生物化学和分子生物学等学