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蛋白质分离纯化的技术方法及其展望

摘要随着蛋白组学的提出与发展，与其相关的技术也层出不穷。而分离纯化是蛋白质研究的首要步骤，是蛋白质后续的结构和功能的研究的基础。本文将对目前蛋白质分离纯化的技术——蛋白质沉淀、层析和双向电泳等技术作简绍，并对其未来的发展作出展望。关键字:蛋白质分离纯化相关技术展望

ArticleaboutProteinSeparationandPurificationTechniqueandItsProspect

Dudan

(Collegeofagronomyandbiotechnology,SouthwestUniversityChongqing，400700，China)

Abstract:Withthedevelopmentofprotiomics,moreresearchesfocusonitscorrelative

techniques,andoverwhelmingamountsoftechniquehavebeenachieved.Inthispaper,somemain

techniquesanditsapplicationswillbecovered.Moreover,itsprospectwillalsobediscussedin

thisreviewpaper.

Keywords:proteomics;correlativetechniques;;perspective

蛋白质分离纯化的一般原则是:利用蛋白质之间的相似性来除去非蛋白的污染;利用各蛋白质之间的差异性来将目标蛋白从其它蛋白中分离开来。每种蛋白质由于氨基酸的种类、数量、排列顺序的多样性以及翻译加工后的修饰使得每种蛋白间的大小、形态、电荷、疏水性、溶解度和生物学活性都会有差异可将蛋白质从混合物中提出并分离出来。蛋白质的分离纯化可大致分为前处理、粗分离阶段和精细纯化阶段。[1]前处理就是将组织细胞破碎，使蛋白质以溶解状态释放出来，并保持其天然构象和原有生物学活性。植物一般采用组织捣碎机和匀浆机破碎法，需要的话可加入石英砂或纤维素酶研磨;必要的话可加入蛋白酶抑制剂等以免蛋白质降解。[2]粗分离主要将目标蛋白迅速和其他细胞成分(DNA、RNA等)，防止目标蛋白降解分开。精细分离纯化阶段则要求将目标蛋白与那些大小即理化性质接近的蛋白质区

[2]分出来，即所需方法分辨率更高，特异性更强。目前常用的蛋白分离提纯的方法有:1.蛋白质沉淀

蛋白质分子能溶于水是因为表面有亲水性的氨基酸。在蛋白质的等电点处，若溶液的离子强度特别高或特别低，蛋白质则倾向于从溶液中析出。此外，基于多种理化因素对蛋白质表面的水化膜或电荷进行破坏和中和后使蛋白质分子间失去排斥力，而彼此靠近、吸引和聚积，最后从溶液中沉淀出来。但其纯化效果只有几倍，通常用于蛋白质的粗提取，去除非蛋白成分。常用沉淀分离方法有以下几种:

1.1盐析法

硫酸铵是沉淀蛋白质最常用的盐，因在冷缓冲液中的溶解度好，而冷缓冲液有利于保护蛋白质的活性。但对不锈钢器具的腐蚀性也很强。蛋白质在硫酸铵中较稳定，可短期保存。1.2有机溶剂沉淀法

有机溶剂沉淀机理是降低水的介电常数，导致具有表面水层的生物大分子脱水,相互聚集,最后析出。该法优点在于:(l)分辨能力比盐析法高,即蛋白质只在一个较窄有机溶剂浓度下沉淀;2)沉淀不用脱盐,较为容易:(3)应用比盐析法广泛。其缺点是对具有生物活性大分子易引起变性失活,操作要求在低温下进行。总体来说,蛋白质和酶的有机溶剂沉淀法不如盐析法普遍。有机溶剂选择使用较多有乙醇、甲醇、丙酮,

1.3其它沉淀法

非离子多聚物沉淀法:多聚物如聚乙二醇(PEG)和防冻剂沉淀出来。PEG是一种惰性的物质对蛋白质的稳定效果好，可长期保存。等电点沉淀法:蛋白质分子上净电荷为零时溶解度

最低,因而易相互聚集成为较大颗粒而沉淀。生成盐复合物沉淀法:金属复合盐法，有机盐法。

多种沉淀法还可混合使用，如等电点法常与盐析法、有机溶剂沉淀法或其它沉淀方法联合使用,以提高其沉淀能力。蛋白质沉淀可通过高速离心或过滤获得。

2.层析技术

层析法是利用不同物质理化性质的差异而建立起来的技术。层析系统都由两个相组成:一是固定相，另一是流动相。当待分离的混合物随流动相通过固定相时，由于各组分的理化性质存在差异，与两相发生相互作用(吸附、溶解、结合等)的能力不同，在两相中的分配(含量比)不同，且随流动相向前移动，各组分不断地在两相中进行再分配。分部收集流出液，可得到样品中所含的各单一组分，从而达到将各组分分离的目的。在生