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义翘神州·在线讲座
《体外诊断--抗体原料制备技术重难点
分析及相关解决方案》
答疑环节汇总
非常感谢大家对北京义翘神州在线讲座的大力支持,本次讲座
已圆满结束,我们对直播过程中答疑环节大家的问题以及老师的解
答进行整理如下。
如果有需要补充的,有任何建议或想听到其他更多相关主题的
讲座,欢迎来信和我们交流,我们会根据您的宝贵意见不断完善,
以后给大家带来更多更精彩的在线讲座!
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问题1:多肽用什么佐剂免疫效果好些,用什么免疫方案?
答:使用弗氏佐剂一般都可以获得较好的免疫效果,如果免疫不理想
可能是偶联效率低,或者多肽序列亲水性和免疫原性不好。
问题2:老师,请问免疫原的设计关注点主要在哪几个方面?
答:主要考虑多肽的亲水性、免疫原性、可及性、特异性、二级结构
和高级结构等方面。
问题3:请问多肽如何免疫?
答:多肽一定要偶联载体蛋白(KLH、BSA、OVA)后再免疫动物。
问题4:多肽偶联载体蛋白怎么选择呢,原则上要考虑什么呢?
答:常用于偶联的载体蛋白有KLH、BSA、OVA,免疫和检测要偶联
不同的载体蛋白,一般情况下载体蛋白有较强的免疫原性,体内会产
生针对载体蛋白的抗体,所以检测时选用与免疫不同的载体蛋白,避
免检测出现假阳性结果。
问题5:请问选择抗原多肽片段的那个分析是用软件做的吗?
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答:是的,这里有一些在线的多个表位分析软件可以免费使用,供参
考:
https://services.healthtech.dtu.dk/service.php?BepiPred-2.0,
:8080/bcpred/predict.html
问题6:老师,糖基化修饰预测使用的什么软件呢?
答:在线的软件都可以做,例如:
http://www.cbs.dtu.dk/services/NetNGlyc/#opennewwindow。
问题7:你好,请问抗体稳定性用什么检测方法判断?蛋白A纯化的
抗体易聚集沉淀有什么方法可以改善?
答:可以用冻融、4℃放置、37℃加速等方法,测定抗体的聚集变化
和活性变化,看一下是否稳定,另外还可以测定热稳定性(Tm)。
避免抗体沉淀的方法有:1)采用预中和;2)可以提高洗脱pH;3)
可在洗脱液中添加一些帮助洗脱的添加剂;4)进行储存制剂优化。
问题8:张老师,请问怎么避免单抗的DG异构化?
答:DG异构化不可避免会发生,可以通过后期抗体改造来排除。
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问题9:请问老师,如何能有效获得抗体的天然构象?
答:抗体表达过程中注意培养环境,纯化过程中注意缓冲液的使用。
问题10:能详细介绍一下单B吗?
答:单细胞技术是通过流式分选、磁珠分选或微流控等方法分离出抗
原特异性的B细胞,单个B细胞可以直接PCR或者体外培养确定阳
性克隆进行P
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