义翘神州在线讲座《SPRBLIELISA分子间亲和力测定常用方法介绍》--答疑汇总.pdf

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义翘神州·在线讲座

《SPR/BLI/ELISA分子间亲和力测定

常用方法介绍》

答疑环节汇总

非常感谢大家对北京义翘神州在线讲座的大力支持，也感谢北

京义翘神州科技股份有限公司王旭曼老师的精彩分享。本次讲座已

圆满结束，我们对直播过程中答疑环节大家的问题以及两位老师的

解答进行整理如下。

如果有需要补充的，有任何建议或想听到其他更多相关主题的

讲座，欢迎来信和我们交流，我们会根据您的宝贵意见不断完善，

以后给大家带来更多更精彩的在线讲座！

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问题1：请问老师，分析小分子与蛋白质SPR的结果，是亲和力在

10^-3到-6之间就表明有结合吗，还有为什么亲和力数值最好要在

分析物的浓度之间，谢谢？

答：SPR的检测范围是10^-3到10^-14，只要这个范围内的亲和力

均可以检测到，有无结合要根据实际实验动力学曲线及质控结果，有

结合解离且质控合格，得出准确的KD值证明存在结合能力。

关于为什么亲和力数值最好在分析物浓度之间，这个结合Elisa饱和

浓度法更容易理解，当配体受体复合物浓度占总受体浓度的一半时，

配体对应的浓度值（EC50）即配体相对于受体的KD值。

问题2：老师，用SPR检测蛋白和小分子结合，如果我的蛋白是两

个异源二聚体的话，在固定的时候怎么固定啊？会不会在检测的过

程两个二聚体分开了？

答：只要你的样品是均一状态、无沉淀或聚集，正常按照固定方法进

行固定，至于二聚体会不会分开，需要前期对蛋白的性质进行研究进

行确定。

问题3：请问老师，BLI的Kd达到了-6次方，这个值准确吗？

答：Octet设备解离koff10^-6是不准确的。

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问题4：请问老师，BLI是否可以检测原核表达的Fab片段？

答：可以，根据具体实验选择传感器。

问题5：请问老师，当样品是细胞液和病毒液时，BLI技术能检测

细胞表面受体与病毒配体结合的亲和力吗？谢谢！

答：可以，BLI可以对多种互作类型进行分析，如：细胞蛋白、

病毒蛋白、抗体抗原、蛋白小分子化合物、蛋白

糖类等等。

问题6：老师您好，请问BLI做亲和力的时候解离往上飘怎么解决

呢？

答：通过降低配体和分析物的浓度进行调整，同时增加缓冲液离子强

度。

问题7：BLI检测抗原抗体亲和力时，PBST做稀释液，时间3分钟，

但是几乎不解离，请问有什么建议吗？

答：延长解离时间，同时尝试降低固化配体和分析物的浓度；或者更

换缓冲液增加离子浓度等方式进行调整。

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问题8：用BLI检测样品亲和力的时候，检测结果中有多个KD，

如何确定最终结果？

答：对于单浓度分析，如筛选不同细胞上清中的抗体亲和力，这种每

个上清都会进行拟合给出KD值，每个KD值就是这个上清的亲和力

数值；对于多浓度分