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3519人凝血因子Ⅸ效价测定法

第一法（一期法）

本法系依据人凝血因子Ⅸ能缩短人凝血因子Ⅸ缺乏血浆凝固时间的原理，以

人凝血因子Ⅸ缺乏血浆为基质血浆，将含有人凝血因子Ⅸ的标准品或供试品及活化部分

凝血活酶（activatedpartialthromboplastintime，APTT）试剂与其混合

后，加入钙离子启动凝固反应，利用血浆凝固时间长短测定供试品中人凝血因子Ⅸ

的效价。

试剂（1）枸橼酸钠溶液称取枸橼酸钠10.83g，加水溶解并稀释至

250ml。

（2）咪唑缓冲液取咪唑0.68g和氯化钠1.17g，加水溶解并稀释至100ml，

加0.1mol/L盐酸溶液42.2ml，用水稀释至200ml（pH7.3）。

（3）稀释液分别取枸椽酸钠溶液和咪唑缓冲液适量（1:5，v/v），混匀，

加20%人血白蛋白溶液适量，制成1%人血白蛋白溶液。

（4）APTT试剂

（5）人凝血因子Ⅸ缺乏血浆人凝血因子Ⅸ含量低于1%的人血浆或人工基

质血浆。

6147g1000ml

（）氯化钙溶液取氯化钙，加水溶解并稀释至。用前用

200.05mol/L

水稀释倍，制成氯化钙溶液。

标准品溶液临用新制。取人凝血酶原复合物标准品1支，照说明书复

溶，用人凝血因子Ⅸ缺乏血浆或0.9%氯化钠溶液稀释制成每1ml含人凝血因

子Ⅸ1IU的溶液，作为标准品贮备液。取标准品贮备液，用稀释液稀释制成3

个不同浓度的标准品溶液，相邻两浓度之比值（r）应相等（如制成每1ml中含

0.1IU、0.05IU和0.025IU的溶液），置冰浴待用。

供试品溶液临用新制。取供试品1瓶，照说明书复溶（若供试品中含

有肝素，复溶后用硫酸鱼精蛋白中和）。用人凝血因子Ⅸ缺乏血浆或0.9%氯化

钠溶液稀释制成每1ml约含人凝血因子Ⅸ1IU的溶液，作为供试品贮备液。

取供试品贮备液，用稀释液稀释制成与标准品溶液3个浓度一致的供试品溶液，

置冰浴待用。

测定法取APTT试剂0.1ml，置37℃保温一定时间（一般4分钟），加人

凝血因子Ⅸ缺乏血浆0.1ml和标准品溶液0.1ml，混匀，置37℃保温一定时间（一

般5分钟），加入已预热至37℃的0.05mol/L氯化钙溶液0.1ml，记录凝固

时间。

用不同浓度的供试品溶液0.1ml替代标准品溶液，同法操作。

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以系列标准品溶液（或系列供试品溶液）效价（IU/ml）的对数对其相应

的凝固时间（秒）的对数作线性回归，照生物检定统计法（通则1431）中的量

反应平行线测定法（3.3）法计算供试品效价及95%置信区间，其95%置信区间

应在测得效价的80%～125%。供试品溶液和标准品溶液的剂量反应曲线相关系数

均应不低于0.98，回归项应非常显著（P0.01)，偏离平行和偏离线性均应不

显著（P≥0.01）。

【】（1）自“用人凝血因子Ⅸ缺乏血浆或0.9%氯化钠溶液稀释制成每

附注

1ml含人凝血因子Ⅸ1IU的溶液”起，依法操作，独立制备2份系列标准品

溶液和供试品溶液，平行测定。同一稀释度两份溶液的凝固时间之差不得超过均值

10%，否则重测。

（2）直接与标准品、供试品和血浆接触的器皿应为塑料制品或硅化玻璃制

品。

（3）如采用全自动凝血仪操作，按仪器使用说明书进行。

（4）偏离线性项变异的差方和与自由度（f）计算公式：差方和

=差方和