流感病毒RNA聚合酶的结构与功能及其应用-病毒学论文-生物学论文.pdfVIP

流感病毒RNA聚合酶的结构与功能及其应

用-病毒学论文-生物学论文

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每次流感大流行都对国际社会稳定和经济发展带来严重影响，

因此很有必要研发流感防治药物。

目前有两类(神经氨酸酶抑制剂和M2蛋白阻滞剂)应用于流

感病毒的药物，但是随着其耐药性逐渐出现，开发有效的靶向不同的

病毒蛋白抗流感药物是迫切需要的。流感病毒RNA聚合酶高度保守，

在流感病毒基因组RNA复制，病毒mRNA转录以及维持病毒生命

周期中发挥着重要作用，因此成为目前药物筛选与研究的首选靶点。

1流感病毒RNA聚合酶的结构

流感病毒RNA聚合酶是一个由PB2，PB1和PA三个亚基

组成的异源多聚体，通过与病毒RNA及核衣壳蛋白组装形成vRNP

复合体来介导病毒基因组的转录与复制(关于vRNP本综述不做详细

介绍)。该多聚体非常稳定，可以通过亲和层析纯化可获得完整的RNA

聚合酶复合体，该复合体又被称为3P蛋白质，相对分子质量大约

250000gmL－1。这3种蛋白质是病毒粒子中分子量最大的蛋白质，

分别为PBl(质量为96000gmL－1)，PB2(质量为87000gmL－1)，

PA(质量为85000gmL－1)。其中分子量较大的两种蛋白质呈偏碱性，

称为碱性蛋白1(basicprotein1，PB1)和碱性蛋白2(basicpro-tein2，

PB2);分子量最小的蛋白质显酸性，称为酸性蛋白质(acidicprotein，PA)。

该蛋白复合物在病毒粒子中位于病毒基因3端，用免疫电镜技术直

接观察到该复合体位于每一个核壳体的一端。

对于RNA聚合酶各亚基的装配及其相互作用也有较多的研

究和报道。通过三维重构技术得到的聚合酶复合体的结构相当紧凑，

各亚基之间无明显界限。通过生化、遗传及结构学研究表明，PB1亚

基位于3P蛋白的核心，PB1亚基的N末端与PA亚基的C末端

相连，PB1亚基的C末端与PB2亚基的N末端相连，形成稳定的

蛋白质复合物。关于这几个亚基相互作用位点存在很大的争议，有研

究报道，PB1通过其N末端(残基1～25)(A/goose/Guangdong/1

/96(H5N1))、C末端(残基678～757)(A/PuertoRico/8/1934)，分别

与PA亚基C末端(残基668～692)(A/goose/Guangdong/1/96

(H5N1))、PB2亚基N末端(残基1～37)(A/PuertoRico/8/1934)

相互连接。此外，有研究表明，这3个亚基都包含一个功能性的核

定位信号(NLS)，其作用是使这几种蛋白质在胞浆合成后能分别的进

入细胞核，之后在细胞核内组装成完整的聚合酶复合物。也有研究表

明，PB1和PA首先装配成异源二聚体，在RanBP5或Hsp90蛋白

的帮助下运输到细胞核内，然后再与核内的PB2装配成完整的聚合

酶复合物。近年来，利用双分子荧光互补(BiFC)方法研

究流感病毒聚合酶复合物(H1N1A/WSN/33)组装中蛋白质-蛋白质相

互作用的试验中，检测到PA及PB2之间的也有相互作用，PA蛋白

N端100个氨基酸残基负责PA-PB2之间的互动。

2流感病毒RNA聚合酶的功能

流感病毒RNA聚合酶复合体是一个多功能酶，不仅具有

RNA聚合酶活性，同时也具有核酸酶活性。

流感病毒的病毒RNA(vRNA)转录形成mRNA过程的启动需

要有加帽的引物(cappedRNAprim-er)，该引物是从宿主细胞的mRNA

上剪切下来的，该功能就是由病毒的RNA聚合酶完成的。具体如下，

在病毒基因组的转录过程中RNA聚合酶以病毒RNA(vRNA)为模板，

通过