CHO-S细胞蛋白表达操作规程.pdf

CHO-S细胞转染操作规程

ExpiCHO™ExpressionMedium不会抑制转染，因此转染

时无需更换培养基。

一、实验材料：

1、ExpiCHO-S™cellsculturedinExpiCHO™Expression

Medium。

2、无菌、无苯酚、无氯化钠，主要是超螺旋结构的含

目的基因的质粒。

N0te：推荐使用《PureLink™HiPurePlasmidKit》试剂

盒抽提质粒。为了保证无菌，可以使用0.22um的过滤器过

滤质粒。

3、抗体表达阳性对照质粒（100µLofthe1mg/mL，由

试剂盒提供）

4、ExpiFectamine™CHOReagent（4℃冷藏使用，使用前

无需预热）

5、OptiPRO™SFMcomplexationmedium（4℃冷藏使用，

使用前无需预热）

6、ExpiCHO™ExpressionMedium（使用前预热至37℃）

Note:转染过程中不能添加抗生素，否则会影响转染效率。

7、Polycarbonate,disposable,sterileErlenmeyerflasks。

8、37℃，8%CO，可空气加湿的摇床。

2

9、测定活细胞密度和百分比的试剂和仪器。（牛鲍计数

板、台盼蓝染液）

二、转染注意事项：

1、新复苏的细胞在转染之前至少要传2代以上。

2、所有针对细胞的操作要严格无菌、动作轻柔，避免

剧烈的震荡或移液，细胞的健康状态对最大程度的提高转染

效率至关重要。

3、如果不使用ExpiFectamine™CHOReagent转染高密度

的ExpiCHO-S™细胞，转染效率将会大幅度降低。

4、ExpiFectamine™CHOReagent使用之前柔和颠倒4-5

次，确保试剂充分混匀。

5、质粒DNA与ExpiFectamine™CHOReagent的混合可

在室温下进行，使用4℃冷藏试剂。

6、一旦ExpiFectamine™CHO/DNA复合物形成，应立刻

将该复合物加到细胞悬液中，5分钟之内不影响转染效率，

但不能超过10分钟。

TheExpiCHO™ExpressionSystem提供了3种不同的蛋白

表达操作规程。

StandardProtocol：

在转染之后的第1天，加入ExpiFectamine™CHO

Enhancer和ExpiCHO™Feed，然后在蛋白表达的整个过程中

一直维持在37℃。

HighTiterProtocol:

在转染之后的第1天，加入ExpiFectamine™CHO

Enhancer和ExpiCHO™Feed，并将细胞培养温度调至32℃。

MaxTiterProtocol:

在转染之后的第1天，加入ExpiFectamine™CHO

Enhancer和singlefeed，并将细胞培养温度调至32℃。然后

在转染之后的第五天再次加入ExpiCHO™Feed。

Note：对于许多蛋白质的表达，采用TheHighTiter和

MaxTiterProtocols获得的蛋白质浓度是StandardProtocol的

2至3倍。但是有些蛋白质采用StandardProtocol可以获得

相近或者更好的表达，这取决于蛋白质本身的特性，选择哪

一种蛋白质表达操作规程，取决于你表达蛋白的目