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常用液体配制标准操作规程（SOP）

国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心

二〇〇八年九月修订

国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心常用液体配制SOP

目录

一、细菌培养系统（责任人：郑子峥）

二、DNA操作系统（责任人：罗文新、陈瑛炜）

三、蛋白质操作系统（责任人：李少伟、顾颖、潘晖榕）

四、细胞培养相关（责任人：程通、张涛）

五、单克隆抗体制备系统（责任人：陈毅歆、）

六、EIA系统（责任人：葛胜祥、熊君辉）

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一、细菌培养系统

1、LB培养基:

每1000mL加分析纯NaCl10g，蛋白胨10g，酵母粉5g，用ddH2O

配制，再用10MNaOH调pH至7.4(1000mL一般加450ul)，高压蒸

汽灭菌15min冷却后使用。

2、固体培养基:

LB培养基中加入琼脂至1.5％，高压蒸汽灭菌15min后使用。

3、10%(g/V)氨苄青霉素钠（Ap）：

注射用氨苄青霉素钠（粉末）50g溶于500ml无菌去离子水中，

溶解后分装入4ml灭菌的EP管，全程超净工作台内操作，避免染菌，

分装后－20度保存，培养细菌时做1000×使用。

注：如果购买的氨苄青霉素粉末不是无菌包装的，溶解后需用0.22

滤膜过滤除菌后再分装。

4、2.5%(g/V)硫酸卡那霉素（Kan）

注射用硫酸卡那霉素（液体）通常是2ml/支，内含0.5g卡那霉素。

取25支药剂（50ml），加入450ml无菌去离子水中，分装入4ml灭

菌的EP管，全程超净工作台内操作，避免染菌，分装后－20度保存，

培养细菌时做1000×使用。

注：如果购买的卡那霉素是粉末状的非无菌包装，溶解后需用0.22

滤膜过滤除菌后再分装。

5、细菌培养：

配制相应抗性培养基，每试管倒入3~4ml培养基（卡那霉素抗性

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培养采用标记试管），无菌牙签挑取单克隆至试管中，于37℃，220rpm

培养。剩余培养基做好抗性和日期标记，置于4℃保存。

6、化学感受态制备：

1）原理:：

细菌处于容易吸收外源DNA的状态叫感受态，这时的菌细胞称

为感受态细胞（Competentcell）。将细菌置于0℃，低渗CaCl2溶液

中时，菌细胞壁和膜的通透性增强，菌体膨胀成球型。外源DNA与

Ca2+形成抗DNase的羟基-钙磷酸复合物黏附于细胞表面，在经42℃

短暂的热冲击处理（一般热休克90s）后能促进细胞吸收外源DNA

复合物。

2）仪器、材料与试剂：

①超净工作台、低温离心机、摇床、-80℃冰箱，装液氮的泡沫

盒及液氮、50ml的离心管2个，50ml的注射器及0.22um小过滤器各

1个。高压灭菌的纸张、透气膜、1.5ml的EP管约350-500个，两块

10cm的平皿板及接种环。

②TB缓冲液：每200ml液体中含Mncl2.4H20(2.176g)、

Cacl2.2H2O(0.44g)、Kcl(3.73g)、PIPES(0.67g)。（注：在电子天平上

的误差50mg,因Mncl2.4H20在PH=6.7易溶故先将其它药品用超纯

水溶解,并用KOH及HCL调PH至6.7。在加入Mncl2.4H20溶解后

用超纯水定溶至相应的量，采用50ml的注射器及小过滤器过滤,一般

储存在-20℃,时间2