p38MAPK在慢性移植物抗宿主病狼疮样小鼠肾组织的表达研究_01.docVIP

PAGE1/NUMPAGES1

p38MAPK在慢性移植物抗宿主病狼疮样小鼠肾组织的表达研究

p38MAPK在慢性移植物抗宿主病狼疮样小鼠肾组织的表达研究p38MAPK在慢性移植物抗宿主病狼疮样小鼠肾组织的表达研究【摘要】目的：

探讨慢性移植物抗宿主病狼疮样小鼠肾组织p38MAPK的表达变化,进而分析p38MAPK在狼疮肾炎肾纤维化发生中的作用。

方法：

将12只雌性(C57BL/6JDBA/2)F1杂交鼠随机分为模型组及正常对照组,每组6只。

于16周末处死，取肾行HE和Masson染色，应用免疫组化方法检测TGF-1、p38MAPK、P-p38MAPK在肾脏的定位表达，RT-PCR法研究各组肾组织TGF-1、p38MAP淆KmRNA的表达,Westernbl唆ot定量检测TGF-1、p38MA惺PK、P-p38MAPK蛋白的表达水梧平，并观察两组小鼠24h尿蛋白排泄量代。

结果：

与正常对照组比较,模型组小鼠蝓24h尿蛋白排泄量、TGF-1、p蒿38MAPK和P-p38MAPK蛋白及mRNA表达均明显增加(P＜),TGF-1与p38MAPK的表达呈正筝相关(r=,P＜)。

结论：

cGVHD淋狼疮样小鼠肾组织中TGF-1、p3粒8MAPK和P-p38MAPK蛋白及颉mRNA表达明显上调,p38MAPK夤信号通路可能在狼疮肾炎肾纤维化的进程蚊中起重要作用。

【关键词】慢性移植樵物抗宿主病；狼疮肾炎；p38MAPK槭；小鼠狼疮肾炎是系统性红斑狼疮最重要的临床表现之一，其病理改变以肾小球、血管、肾小管及其间质损害为特征，最挪终急性或慢性进展为肾脏纤维化甚至肾功纹能衰竭。

肾脏纤维化不仅是各型LN进展壹到终末期的共同病理表现，而且也是患者阆病情的重要反映指标，在其发展过程中，包多种因素发挥着重要作用,其中TGF-骑1起着关键作用。

有丝分裂原活化蛋白痉激酶(mitogen-activat殿edprotEinkinase,MA唾PK)级联是细胞内重要的信号转导系统攸,它参与胞外信号从表面转导到细胞内部苏的过程,为细胞内信息传递的共同通路。

锱近年来许多研究结果表明，其亚族p38兢丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)咋作为信号转导通路的交汇点在肾脏纤维化闵的发生发展中起着重要作用，但在LN肾磨纤维化的发生过程中是否起作用尚未见报道。

因此本研究通过构建慢性移植物抗宿滔主病(chronicgraftversushostdisease,cGV咽HD)狼疮样小鼠模型,探讨作为TGF胨-1下游信号介质，p38MAPK在橐LN发展过程中的表达与活化及其可能的与作用机制。

1材料与方法实验动匮物8～10周龄雌性(C57BL/6昴JDBA/2)F1杂交鼠(以下称杂舷交鼠)及6～7周龄DBA/2小鼠购自澧中山大学医学动物中心,体重()g,籁SPF级，饲养于本校公共卫生学院SP疲F动物房。

模型的建立与分组［1镅］制作cGVHD狼疮样小鼠模型。

按随机、对照设计原则将12只杂交鼠分成模郾型组及正常对照组,每组6只。

取DBA萱/2小鼠脾脏、胸腺、淋巴结细胞,制成晕单细胞悬液(约60%脾细胞、30%胸腺及10%淋巴结细胞),分别于0、3、7、10d经尾静脉注射于模型组杂交ㄖ鼠,用台盼蓝染色和细胞计数板计数,保蝻证活细胞数大于95%,且每次给予细胞碇数为50106个。

正常对照组则于相呦应时间经尾静脉注射等体积生理盐水。

两贱组小鼠首次尾静脉注射后每两周留取1次24h尿,至16周处死动物，立即取下圈肾脏,一部分置于-70℃低温保存,另谌一部分置于10%中性福尔马林溶液中固掘定后行组织病理学检查。

24h尿蛋跸白量测定用双缩脲比色法测定尿蛋白,哼小鼠尿液1∶5稀释后按操作说明书操作。

RT-PCR总RNA提取罩从-70℃低温冰箱中取出肾组织,迅速否用Trizol(晶美生物技术有限公司淞)匀浆提取总RNA。

取5l总RNA何进行甲醛变性凝胶电泳,紫外灯下观察5杓、18、28s条带清晰提示RNA完整