使用细胞工厂进行细胞培养.pdfVIP

比较细胞工厂与10L转瓶培养Vero细胞和产毒情

况

一、实验目的

1、了解熟悉细胞工厂的使用，清洗及再利用的方法；

2、比较细胞工厂与10L转瓶同等条件下培养Vero细胞时各自细胞的生长状

态；

3、比较细胞工厂与10L转瓶培养Vero细胞加毒之后细胞的状态变化和产毒

情况；

4、通过实验分析用细胞工厂代替原有转瓶生产优缺点；

5、通过实验发现细胞工厂中常见问题。

二、主要实验工具及材料

干净的10L转瓶一个（表面积约为2278㎝2）；

NUNC公司4层细胞工厂一个（表面积为2520㎝2，编号：140360），自带一

个插拔塞和旋口塞

细胞生长液；细胞维持液；毒种（CTN-1V株工作种子批毒种）

三、实验过程

（一）培养Vero细胞，观察分析及注意事项

将一瓶已长成致密单层细胞消化，制备成细胞悬液，计数后，按照每ml溶液

含有1×105个细胞数，及每平方厘米贴壁细胞数相同，根据面积比计算出加入ml

数。加入细胞后放置于37℃恒温室中培养。

细胞悬液浓度：2.32×106个/ml

溶液总体积（ml）加入细胞悬液体积（ml）面积细胞数（个/cm2)

细胞工厂80034.48

10L转瓶150031.03

观察、分析

2010-8-5

11：00加入细胞和培养液于细胞工厂和10L转瓶中培养

13：30观察：细胞工厂中的贴壁细胞数量较10L转瓶多，溶液中含有大量

的悬浮细胞

分析：细胞工厂是静置培养，细胞贴壁较10L转瓶快

2010-8-6

9：10观察

细胞工厂：细胞状态良好，已伸展，分布均匀

10L瓶：细胞状态一般，少许伸展，分布稍有不均

分析：10L转瓶中的细胞贴壁不均匀，可能是由于细胞总数较少造成

（二）加入病毒后，Vero细胞状态的观察分析

2010-8-9

9：30观察（加毒前）

细胞工厂：细胞生长成致密单层，间隙很小，排列整齐，分布均匀

10L转瓶：细胞生长成致密单层，间隙很小，排列较整齐，分布稍有不均匀

加毒前更换培养液为维持液，再根据比例加入3.1ml（10L转瓶）3.4ml(细胞

工厂)病毒

2010-8-109：00观察

细胞工厂与转瓶中的细胞无明显变化，状态正常，轮廓清晰

2010-8-119：30观察

细胞工厂与转瓶中的细胞状态正常，无明显病变，无悬浮细胞；10L转瓶的

颜色稍浅

2010-8-129：00观察

细胞工厂与转瓶中的细胞局问成拉网状，有少量悬浮细胞出现，并且细胞工

厂中的悬浮细胞较10L转瓶多，细胞工厂中的PH维持正常，颜色无变化，10L转

瓶的PH维持不好，颜色变化明显，PH下降明显。

分析：细胞工厂较10L瓶透气性好，所以PH维持得好

2010-8-139：15观察

细胞工厂与转瓶中的悬浮细胞数量增多，大部分细胞病变明显，成拉网状

（三）收获病毒液

2010-8-169：30收获病毒液前观察

细胞工厂与10L转瓶中有大量的悬浮细胞，考虑收获病毒液。

收获病毒液取样：分别从细胞工厂和10L转瓶中取样于青霉素小瓶中，送样

检测抗原和感染性滴度

四、实验结果分析

抗原结果和滴度结果

此次实验结果显示，细胞工厂制备的狂犬病毒液，抗的含量和感染性滴度均

好于转瓶工艺制备的病毒液。可能与下述原因有一定关系：

（1）细胞工厂为静止培养法，接种细胞后细胞贴壁良好，分布与较均匀，而

转瓶细胞贴壁时间较长，并且稍有不均，因此在一定时间内，细胞工厂细胞长势稍

好一些；

（2）10L瓶的细胞表面积少于细胞工厂，接种的