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实验原理：质粒的转移性细菌的遗传重组有接合转移、转化和转导三种主要方式。接合转移是指供体和受体细胞间直接接触，质粒DNA从供体向受体转移的过程。质粒可分为可转移质粒和非转移质粒两类，转移质粒带有完整的编码转移酶的tra基因，质粒能自主地从一个细胞转移到另一个细胞，甚至还能带动供体细胞的染色体DNA向受体细胞转移，这类质粒常被称为自主转移质粒。如大肠杆菌的F质粒。有些质粒不含tra基因，但含有质粒转移起始位点oriT，虽不能自主转移，但能被其他一些含完整tra基因的质粒所诱动，这类质粒又被叫做可诱动质粒。本实验所用供体质粒本实验中要转移的质粒pSET152，5.5kb,基因型为ΦC31int/attP,aac(3)IV,pUC18复制子,lacZα,链霉菌的两亲本接合转移实验菌株供体菌：E.coliS17-1/pSET152受体菌:StreptomyceslividansZX1（变铅青链霉菌）实验产物接合转移子:StreptomyceslividansZX1/pSET152实验准备工作菌株准备（教师做）：供体准备培养E.coliS17-1/pSET152：接种到液体LB培养基5ml+Apr50μg/ml,37℃震荡培养过夜。第二天扩大培养至50mlLB+Apr50μg/ml。浓缩：每50ml的培养物浓缩到5ml，每1.5ml的离心管分装1ml。准备链霉菌S.lividansZX1的孢子将链霉菌孢子用TSB清洗两遍，再用TSB悬浮，每1.5ml的离心管分装100ul。（需要现做现用）操作步骤（第一天）清洗E.coliS17-1(pSET152），以除去残留的抗生素。每组同学取1支装有1ml浓缩的E.coliS17-1(pSET152），用无菌水清洗。先将1ml的菌液用12000rpm/min，离心1min，然后迅速到超净工作台倒去上清液。加入1ml的无菌水，在振荡器上将菌体打散混匀后，同样用12000rpm/min，离心1min。重复以上操作三次，最后将菌体用1ml的无菌水悬浮。孢子每组同学拿一支准备好的孢子放入50℃水浴锅进行热激处理10min。然后转入37℃水浴温浴培养0.5-1小时（预萌发）。将预萌发好的孢子用LB培养基清洗三次，最后用100ulLB悬浮。预萌发过程每四组找一个同学倒平板。第一、三、五、七组的第一个同学融化1瓶250ml的培养基，倒平板10-11皿，供8个同学使用。每组同学取100ul的E.coliS17-1/pSET152细胞和100ul预萌发好的链霉菌孢子混合均匀，静置5min左右，再将混合液涂M-ISP4平板。同时将没有同E.coliS17-1/pSET152混合的100ul的孢子涂在另一个M-ISP4平板上，作为阴性对照。将平板送去30℃培养箱恒温培养16-22个小时（至第二天早上）操作步骤（第二天）用阿伯拉抗生素和萘啶酮酸混合液对接合转移平板进行覆盖进行覆盖.将600ul的Apr（阿伯拉抗生素）和600ul的Nalidixicacid（萘啶酮酸）溶液混合在一只1.5ml的EP管中。然后将混合好的溶液均匀地涂布在接合转移平板上。将平板在超净工作台吹干后，放于30℃培养箱培养。约3-5天后（下一次实验时）观察接合转移子。**链霉菌与大肠杆菌的属间接合转移
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