原创力文档- 1、本文档共3页，可阅读全部内容。
- 2、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
PAGE1/NUMPAGES1
ifn-γ诱导鹦鹉热嗜衣原体持续性感染及相关基因的表达
IFN-诱导鹦鹉热嗜衣原体持续性感染及相关基因的表达硕士研究生：
陈芝喜导师：
吴移谋教授中文摘要目的：
建立IFN-诱导的鹦鹉热嗜衣原体（Chlamydophilapsittaci，Cps）持续性感染的细胞模型，检测与Cps6BC持续性感染相关基因的表达变化。
方法：
体外培养HeLa单层细胞感染Cps6BC标准菌株，分别用5、15、25、35、45、55ng/mL的人重组干扰素-（recombinanthunanIFN-，rhIFN-）诱导Cps6BC持续性感染30h和用35ng/mLrhIFN-诱导12、24、36、48、60h，利用间接免疫荧光染色法（indirectimmunofluorescenceassay，IFA）检测Cps6BC感染能力的变化。
用IFA和透射电镜检测rhIFN-诱导Cps6BC持续性感染后包涵体形态的变化。
rhIFN-诱导Cps6BC持续性感染后，去除诱导剂，补充足量的L-色氨酸，利用IFA和透射电镜检测Cps6BC感染能力和包涵体形态的恢复情况。
用Realtime-PCR检测Cps6BC持续性感染状态下目的基因的mRNA表达水平的变化以及Westernblot检测CPSIT_0844、CPSIT_0594蛋白表达水平的变化。
结果：
用不同浓度的rhIFN-诱导Cps6BC标准株持续性感染30h后，Cps6BC的感染能力均降低，且呈明显的剂量依赖关系。
35ng/mLrhIFN-诱导不同时间后，Cps6BC的感染能力也出现不同程度的下降，尤其是36、48、60h后感染能力显著降低。
IFA和透射电镜观察显示，rhIFN-诱导后，Cps6BC包涵体体积变小，结构疏松，并可见异形网状体，成熟子代原体数目减少，呈现典型的持续性感染特征。
去除诱导剂，补充足量的L-色氨酸后，Cps6BC的感染能力及包涵体形态2均可恢复到急性感染状态。
rhIFN-诱导Cps6BC持续性感染后，CPSIT_0844、CPSIT_0846、CPSIT_0959、CPSIT_0594、CPSIT_0310、CPSIT_0870、CPSIT_0057、CPSIT_0208在mRNA水平的表达均发生了一定的改变。
核糖体蛋白CPSIT_0870在2～36h显著上调，而半胱氨酸脱硫酶CPSIT_0959在36h、48h显著下调。
Ⅲ型分泌系统效应蛋白CPSIT_0594、CPSIT_0844均在2～48h上调，且分别在36h和48h显著上调，而CPSIT_0846在2～24h显著上调，36h后显著下调。
膜蛋白CPSIT_0057、CPSIT_0310在2～48h上调，而CPSIT_0208在48h后下调。
Westernblot结果显示，rhIFN-诱导Cps6BC持续性感染后，CPSIT_0844、CPSIT_0594蛋白表达的改变与其mRNA水平的表达变化一致。
结论：
1.建立了rhIFN-诱导的Cps6BC持续性感染细胞模型；2.CPSIT_0844、CPSIT_0846、CPSIT_0959、CPSIT_0594、CPSI...
文档评论（0）