3.1 重组DNA技术的基本操作（第二课时）（课件）-高二生物（人教版2019选择性必修3）.pptx

第3章基因工程工程第1节重组DNA技术的基本工具（第二课时）

目标010203关注基因工程的诞生和发展历程，参与讨论基础理论和技术发展如何催生基因工程。（社会责任）探究DNA的物理与化学性质，进行DNA分子的提取与鉴定。（科学思维）运用结构与功能观说明基因工程的各种工具的特点。（生命观念）学习目标

限制酶DNA连接酶载体①对受体细胞无害；②有一个至多个限制酶切割位点；③有特殊的标记基因；④能自我复制或能整合到宿主DNA上。质粒、噬菌体、动植物病毒基因工程的基本工具作为载体的条件种类：磷酸二酯键来源：主要来源于原核生物特点：作用部位：具有专一性结果：形成黏性末端或平末端连接部位：磷酸二酯键种类：E.coliDNA连接酶、T4DNA连接酶作用：把两条双链DNA片段拼接起来温故知新

实验原理材料用具实验步骤粗提取原理鉴定原理DNA的粗提取和鉴定探究.实验

概述DNA粗提取和鉴定的原理，以及材料的选择。以小组为单位画出实验流程简图。2341合作探究一：请同学们自主阅读教材P74-75，小组合作思考讨论完成问题。第一次过滤后DNA在沉淀中还是上清液中？你能分析出粗提取的DNA中可能含有哪些杂质吗？DNA的粗提取和鉴定探究.实验

原理一原理二原理三思路：DNA、RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面存在差异，可以利用这些差异，选用适当的物理或化学方法对它们进行提取DNA不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精DNA能溶于物质的量浓度为2mol/L的NaCl溶液在一定温度下，DNA被二苯胺试剂染成蓝色DNA的粗提取和鉴定探究.实验一、实验原理：

DNA的粗提取和鉴定探究.实验二、实验材料及用具：DNA含量相对较高的生物组织，如新鲜洋葱、香蕉、菠菜、菜花和猪肝等。1.选材：问题1:能否选用牛、羊、马、猪等哺乳动物的红细胞做实验材料？不能选择哺乳动物成熟的红细胞，因为哺乳动物成熟的红细胞中没有细胞核和线粒体，几乎不含DNA。

DNA的粗提取和鉴定探究.实验2.试剂：试剂研磨液体积分数为95%的酒精二苯胺2mol/L的NaCl溶液蒸馏水溶解并提取DNA析出DNA溶解DNA鉴定DNA，要现配现用研磨液成分作用SDS使蛋白质变性EDTA抑制DNA酶Tris-HCl缓冲液稳定DNA二、实验材料及用具：

DNA的粗提取和鉴定探究.实验三、实验步骤：研磨加酒精析出溶解与鉴定提取上清液取上清液充分研磨纱布过滤95%冷酒精离心离心丝状物沉淀物

DNA的粗提取和鉴定探究.实验三、实验步骤：

DNA的粗提取和鉴定探究.实验三、实验步骤：1.破碎细胞——称取，切碎，放入研钵，倒入，研磨。洋葱研磨液充分问题2:如果研磨不充分会对实验结果产生怎样的影响？研磨不充分，会使DNA分子不能从细胞核中释放出来，从而使研磨液中的DNA含量较低，影响最终提取的DNA量。

DNA的粗提取和鉴定探究.实验三、实验步骤：2.去除杂质——在漏斗中垫上过滤研磨液，4℃冰箱中静置后取；或将研磨液倒入塑料离心管中离心，取。纱布上清液上清液问题3:过滤能否用滤纸代替纱布？不可以。因为DNA会被吸附到滤纸上而大量损失，影响最终提取的DNA量。问题4:此步骤获得的上清液中可能含有哪些细胞成分？可能含有DNA、RNA以及蛋白质、脂质、糖类等。

DNA的粗提取和鉴定探究.实验三、实验步骤：3.DNA的粗提取——在上清液中加入体积相等的溶液,静置2~3min，溶液中出现的就是粗提取的DNA。预冷的酒精白色丝状物用冷却的酒精析出DNA问题5:此步骤的目的是？使蛋白质等溶解在酒精中，DNA不溶于酒精而析出。预冷的酒精的优点①可抑制核酸水解酶的活性，进而抑制DNA降解；②抑制分子运动，使DNA易形成沉淀析出；③低温有利于增加DNA分子的柔韧性，减少其断裂。

DNA的粗提取和鉴定探究.实验三、实验步骤：3.DNA的粗提取——用玻璃棒沿搅拌，卷起，并用滤纸吸去上面的水分：或将溶液倒入塑料离心管中离心，取晾干。一个方向沉淀物丝状物问题6:为什么要用玻璃棒沿一个方向缓慢搅拌？避免破坏DNA用冷却的酒精析出DNA

DNA的粗提取和鉴定探究.实验三、实验步骤：4.DNA的鉴定——试管编号A（对照组）B（实验组）步骤12mol/L的NaC1溶液5mL步骤2不进行任何处理步骤3步骤4沸水浴加热5min实验现象实验结论加丝状物或沉淀