ELISA试验技术要点.pdfVIP

ELISA试验技术要点--第1页

酶联免疫吸附试验

（Enzyme-LinkedImmunoabsorbentAssay,ELISA）

一、基本原理：

利用标记技术将酶标记到抗体（抗原）上，使待检物中相应的抗原（抗体）与酶标记抗

体（抗原）发生特异性反应。在遇到相应的酶底物时，酶能高效、专一催化、分解底物，生

成有颜色的产物。根据颜色的深、浅，可以判断待检物中有无特异的抗原（抗体）以及量的

大小。该方法可对待测样品进行定性和定量分析，同时具有微量、特异、高效、经济、简便

等优点，因此是一种广泛应用于生物和医学领域的微量测定技术。

目前使用的酶联免疫检测方法很多，应用较多的有：

间接法——用于测定抗体

双抗体夹心法——主要用于测定大分子抗原

竞争抑制法——主要用于测定小分子抗原

二、试验材料及试剂

酶标板（聚苯乙烯微量96孔板）

包被液（0.05MpH9.6碳酸盐冲液）

无水NaCO1.59g

23

NaHCO32.93g

蒸馏水定容至1000ml

洗涤液（0.1MpH7.4磷酸盐缓冲液）

NaCl8.0g

KCL0.2g

KHPO0.2g

24

NaHPO•12HO2.9g

242

吐温-200.5ml

蒸馏水加至1000ml

封闭液

明胶1g

包被液100ml

抗体稀释液

明胶0.1g

洗涤液100ml

ELISA试验技术要点--第1页

ELISA试验技术要点--第2页

底物缓冲液（pH5.0柠檬酸-磷酸缓冲液）

0.1M柠檬酸(19.2g/L)24.3ml

0.2MNaHPO(28.4g/L)25.7ml

24

蒸馏水50ml

TMB底物使用液

0

TMB储存液（100mg溶于10mlDMSO,4C保存）0.1ml

底物缓冲液10ml

30%HO10ul

22

现用现配

终止液（2MHSO）