分子诊断在感染性疾病中的应用 (2).ppt

分子诊断在感染性疾病中的应用;感染的慨念;感染性疾病的分子诊断策略;分子生物学检验技术在感染性疾病中的应用主要包括对病原生物进行鉴定、分型、耐药诊断和治疗过程中的疗效监测等

动态、定量地检测病原体核酸，能对疗效判断和病情预后评价提供客观的依据

目前已经应用于一些重要的感染性疾病，如结核病、病毒性肝炎、艾滋病、SARS、人禽流感等;一、感染性疾病的诊断和治疗监测

;

感染方式

呼吸道、消化道或皮肤损伤侵入机体

所致疾病

疾病种类多样化

以肺结核为主;生物学主要特点：

1.结核分枝杆菌细胞壁中含有大量脂质

2.引起的疾病都呈慢性，并伴肉芽肿

3.抗酸染色阳性;实验室诊断现状;分子生物学检测方法;现代分子生物学快速诊断;共价封闭环状结构

标准株结核分枝杆菌

基因组全长4.4kb,

包含4000个蛋白质编码基因

和50个RNA编码基因

;MDR早期诊断;高效：一个样本可同时检测结核分枝杆菌和NTM

快速：4周（菌培）3小时

灵敏：10个菌/反应（TB）；102个菌/反应（NTM）

;高效：同时检测17种分枝杆菌（包括TB）

快速：＞4周（菌种鉴定）6小时

灵敏：103个菌/反应

;通量：两个一线抗结核药（MDR）

速度：8周（药敏）6小时

灵敏度：103个菌/反应;病毒性疾病的分子检测;乙型肝炎病毒（hepatitisBvirus,HBV）;;HBV基因组结构;急性感染时期HBV的标志物;HBV分子诊断方法;1．样本处理（样本处理区）

2．核酸扩增

2.1试剂配置（PCR前准备区）

2.2加样（样本处理区）

2.3PCR扩增（检测区）

;HBVDNAFQ-PCR（real-timePCR）;支链DNA（bDNA）技术;还可以用于乙肝病毒基因检查的方法主要有：荧光PCR法、竞争PCR法、PCR酶联免疫吸附法、荧光标记物法和PCR酶联化学发光等方法。;变异株与耐药突变检测;HBV耐药突变类型及其核苷酸、氨基酸变化;46.91℃54.64℃50.74℃;丙型肝炎病毒（HCV）;HCV;HCV基因组（单链RNA）;HCV基因分型的多样性;HCV分子诊断;HCV-RNA定量试验;HCVRNA定量（real-timeRT-PCR）;HCVRNA定量结果表示方法;特别说明;HCV基因型测定;人类免疫缺陷病毒

（HIV）;全国累计报告HIV感染者地理分布;HIV在宿主细胞中的复制;HIV基因组;HIV基因组;HIV基因组遗传变异率高;HIV-1感染后病毒标志物的变化;HIV病毒载量（HIVRNA定量）;病毒基因组是双链DNA.

具有宿主和组织特异性：人是HPV惟一自然宿主

传播途径：主要通过接触感染

经性接触传播

新生儿可经产道感染

不同型的HPV侵犯的部位和所致疾病也不同

HPV的免疫防御机制尚不十分清楚

HPV的致癌潜力分为

高危型：主要包括HPV16、18、31、33、45、35、39、51、52和58等（其中HPV16和HPV18与子宫颈癌发生密切相关）

低危型：主要包括HPV6和HPV11;《中国妇女人乳头状瘤病毒（HPV）感染和宫颈癌流行病学调查》

大规模的人群专项调查发现：我国城乡妇女高危型HPV感染率均较高，并在20~24岁和40~44岁两个年龄段呈现感染高峰；

以医院为基础、覆盖7个地区的调查显示：我国妇女83%的子宫颈浸润癌、84%的子宫颈鳞癌均有HPV16型或18型引起；

HPV16型和18型是导致我国妇女患子宫颈癌的最主要原因

;HPV检测;SARS相关冠状病毒;SARS冠状病毒（SARScoronavirus）;SARACoV基因组;SARACoV检测;检测标本

痰液、咽拭子、鼻拭子、支气管肺泡灌洗液、

血浆、粪便。

有报道显示，在可能SARS病人中病毒的检出

率为100%。

在疑似SARS病人中的检出率为23%。

所有健康接触者中未检测到病毒。

;另一项研究显示

检测病毒的3种方法（血清学检测、病

毒分离、PCR技术）中，PCR技术的检出率

最高。;讨论;SARS相关冠状病毒基因检测必须注意的问题